环氧合酶-2在口腔鳞癌发生过程中的表达和意义

高前嵩,蒋　勇

(安徽医科大学第四附属医院口腔科,安徽 合肥　 230022)



环氧合酶-2在口腔鳞癌发生过程中的表达和意义

高前嵩,蒋勇

(安徽医科大学第四附属医院口腔科,安徽 合肥 230022)

摘要：目的通过研究环氧合酶-2(COX-2)在正常口腔黏膜、口腔黏膜不典型增生、口腔鳞状细胞癌(OSCC)中表达的情况，分析所得到的结果，从而对COX-2在口腔鳞癌发生发展过程中所发挥的作用进行探讨。方法随机选取60例口腔鳞状细胞癌及20例口腔黏膜不典型增生组织标本为研究对象，并选取20例正常口腔黏膜标本作为对照，采用免疫组织化学染色的方法检测COX-2的表达情况，进一步分析COX-2的表达水平与口腔黏膜病变的关系。结果正常口腔黏膜中未见COX-2阳性表达，而COX-2在口腔黏膜不典型增生及口腔鳞状细胞癌组织中表达的阳性率分别为65.0%、78.3%，口腔鳞状细胞癌中表达强度明显高于口腔黏膜不典型增生组织(P=0.0217)。结论COX-2在口腔鳞状细胞癌以及口腔黏膜不典型增生中有不同程度的高表达，COX-2可能在口腔鳞癌发生发展过程中起重要的作用。

关键词：口腔鳞癌；口腔黏膜不典型增生；环氧合酶-2

口腔癌是口腔颌面部较为常见的发病率较高的一种恶性肿瘤。口腔癌的发病率仍然具有着逐渐上升的趋势[1]。口腔鳞状细胞癌一般可以占到口腔癌的80%左右。近年来，虽然在放疗、化疗和手术等方面取得了一定的进展，但是口腔鳞癌的五年生存率较低，仍然低于50%[2]。

环氧合酶(cyclooxygenase,COX)是花生四烯酸转化为前列腺素的限速酶[3]。COX一般存在着环氧合酶-1(COX-1)和环氧合酶-2(COX-2)。COX-1非常稳定的表达于大多数正常的细胞中。而COX-2一般不怎么表达于静息细胞中。只有当机体受到了一些因子的相关刺激后，它才会迅速开始合成并且表达，COX-2与细胞凋亡、肿瘤发生等密切相关[4]。本研究主要是通过观察COX-2在口腔鳞状细胞癌、口腔黏膜不典型增生、正常口腔黏膜中的表达情况，分析所得到的结果，从而对COX-2在口腔鳞癌发生发展中所发挥的作用进行分析和探讨。

1临床资料与方法

1.1病例资料随机抽选从2014年3月—2015年3月期间本院住院手术病人的病理档案。其中收集口腔鳞癌60例，平均年龄53.4岁；男性36例，女性24例；高分化17例、中分化38例、低分化5例。收集口腔黏膜异常增生20例，平均年龄48.5岁，男性12例，女性8例，轻度9例、中度6例、重度5例。这些病理组织都是取自手术切除，并且术后都经过2位病理科医生的明确诊断。这些患者术前没有经过任何治疗。另取20例正常口腔黏膜做为对照，来自于拔牙患者手术中切除的牙龈组织。全部标本都经过4%多聚甲醛磷酸缓冲液(pH=7.4)固定，石蜡包埋处理，然后3 μm连续切片。

1.2材料鼠抗人COX-2单克隆抗体购自美国Cayman公司，工作浓度为10 mg·L-1。免疫组化S-P试剂盒、DAB显色试剂盒、即用型PBS磷酸盐缓冲液(0.01 mol·L-1，pH=7.5)、即用型抗原修复液(Citrate枸橼酸缓冲液，0.01 mol·L-1，pH=6.0)、防脱片剂(左旋多聚赖氨酸)、中性树胶均购自福建迈新生物技术有限公司。

1.3操作步骤(1)将石蜡切片放置于62℃烤箱中，烘烤约2 h左右，然后逐步脱蜡至水，PBS(pH=7.5)冲洗3次，每次约3 min；(2)以0.01 mol·L-1(pH=6.0)柠檬酸缓冲液高压修复3 min,自然冷却至室温；PBS冲洗3次，每次3 min；(3)除去PBS液，每张切片滴加3%双氧水，室温下孵育10 min；PBS冲洗3次，每次3 min；(4)除去PBS液，每张切片滴加正常山羊血清封闭液，在室温下孵育15 min后，倾去，勿洗；(5)滴加按1∶100比例稀释的一抗工作液，置于4℃冰箱过夜；(6)PBS液冲洗3次，每次5 min，甩干；(7)每张切片滴加生物素化二抗工作液，室温下孵育10 min后，用PBS液冲洗3次，每次5 min，甩干；(8)除去PBS液，每张切片滴加新鲜配置的DAB显色液，在显微镜下观察，显色5～15 s；(9)苏木精复染10 s,自来水冲洗返蓝2 min,梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.4判定方法及标准在细胞质中COX-2阳性染色的标准一般是呈现着棕黄色的弥漫性分布。由2位病理科医生采用双盲法进行独立检测，一般在免疫染色最多的区域计数100个细胞，以阳性细胞占肿瘤细胞总数百分比和染色强度来进行综合计分：(1)着色细胞占计数细胞的百分比：≤5%为0分，>5%～≤25%为1分，>25%～≤50%为2分，>50%为3分；(2)染色强度：无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分。这两类结果进行相加，0～1分为(-)，2～3分为(+)，4～6分为(++)，6分以上为(+++)。

1.5统计学方法使用SPSS17.0软件包来对COX-2在正常口腔黏膜、口腔黏膜不典型增生和OSCC中表达的情况进行处理，应用秩和检验方法。若P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1免疫组化染色结果在正常口腔黏膜中未见COX-2表达，在口腔黏膜不典型增生、口腔鳞癌中可见不同程度表达，见图1～3。

图1　正常口腔黏膜(×400)

图2　不典型增生中阳性表达(×400)

图3　鳞癌组中阳性表达(×400)

2.2结果比较口腔黏膜不典型增生及鳞状细胞癌的COX-2表达结果见表1。在正常的口腔黏膜上皮中无COX-2阳性表达。不典型增生组和鳞癌组在各种程度和分级间COX-2的表达均无显著性差异(P>0.05)。不典型增生组和鳞癌组之间比较，差异有显著性(P<0.05)。

表1　口腔黏膜不典型增生及鳞状细胞癌COX-2表达/n

3讨论

在我国，口腔鳞状细胞癌(OSCC)常见于舌、颊、牙龈等。肿瘤形成的主要原因是肿瘤细胞的凋亡和增殖失衡[5]。在一些早期的患者中，也许没有一些很明显的症状，但是伴随着病情的进一步发展下去，有些患者将可能会出现一些病理表现，例如肿块、结节、斑块等，还有一些患者甚至出现了一系列症状，例如口齿不清、吞咽困难等，而这些将会对患者的正常生活造成一定的影响。口腔黏膜不典型增生是一种较为常见的癌前病损。许多研究表明口腔黏膜的不典型增生通常会转变为OSCC[6]。

目前的一些研究认为 COX-2 基因主要是定位在第1号染色体 lq25．2 ～ 25．3 上，长度大概为8.3 kb，构成是由10个外显子和 9个内含子，而它的 mRNA 转录产物大概长度为 4.5 kb。有研究证实，像纤维蛋白原、C-反应蛋白和白细胞介素-6 等与 COX-2 基因多态性存在明显相关性[7]。

近年的研究发现：人类多种恶性肿瘤及癌前变组织中均有COX-2的高表达[8]，COX-2与肿瘤的浸润、淋巴结转移有关[9]。已有研究证实，COX-2基因-765G/C 与哮喘、胃癌、结肠癌、食管癌等疾病存在极大相关性[10]。Peng等[11]研究了咽部鳞癌中COX-2的高表达率在 N1～N3组明显高于N0组。Shadab等[12]对COX-2在口腔鳞癌的表达进行研究，得出有15.9%的鳞癌组织呈现COX-2过表达。

口腔黏膜癌变的机制目前是临床上一个新的研究热点。而癌前病变转变为肿瘤的过程，主要包括[13]局部微环境的变化，细胞因子间的正、负反馈网络，多种因子共同作用引起细胞生长周期变化，刺激肿瘤血管生成等。根据本实验结果，我们可以得出:COX-2不表达于正常口腔黏膜上皮组织，而在口腔黏膜不典型增生和口腔鳞癌中有着不同程度的表达，所以认为COX-2在口腔鳞癌的发生发展过程中还是起着一定的作用。为了更有效的去研究COX-2在口腔鳞癌发生发展过程中的一些作用，我们还应该进一步的深入去探讨，例如COX-2在影响肿瘤的发生发展机制方面、COX-2抑制剂在肿瘤的化学治疗方面等。因此，对于目前的研究，仍然存在着许多问题需要进一步的探讨。

参考文献：

[1]徐正茂,韩前超,刘敏.COX-2与Survivin在口腔扁平苔藓中的表达及其意义[J].口腔医学研究,2011,27(2):136-138.

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[3]王晓波,赵志宇,张玉芹,等.环氧化酶2和 Ki-67 在口腔鳞状细胞癌中的表达及相关性研究[J].中国医药，2012,7(8):1036-1038.

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[9]Thiel A,Mrena J,Ristimki A.Cyclooxygenase-2 and gastric cancer[J].Cancer Metastasis Rev,2011,30(3/4):387-395.

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[11] Peng JP,Su CY,Chang HC,et al.Expression of cyclo- oxygenase-2 is correlated with high intratun oral micro vessel density and low apoptotic index in human esophageal squamous cell carcinomas[J].Hum Pathol,2012,33(1):100-104.

[12] Mohammad S,Ram H,Gupta PN,et al.Overexpression of COX-2 oral squamous cell carcinoma patients undergoing chemoradiotherapy[J].National Journal of Maxillofacial Surgery,2011,2(1):17-21.

[13] Sudha VM,Hemavathy S.Role of bcl-2 oncoprotein in oral potentially malignant disorders and squamous cell carcinoma: and immunohistochemical study[J].Indian Dent Res,2011,22(4):520-525.

(收稿日期：2016-01-04，修回日期：2016-02-10)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.04.031