丹参对于急性微循环障碍大鼠血管内皮细胞的保护作用*

陈　瑶　王胜娟　李朝玲　李　锋

第四军医大学西京医院中医科(西安 710032)



丹参对于急性微循环障碍大鼠血管内皮细胞的保护作用*

陈瑶王胜娟李朝玲李锋△

第四军医大学西京医院中医科(西安 710032)

摘要目的：研究丹参对盐酸肾上腺素及冰水刺激造成急性微循环障碍大鼠模型的保护作用及分子机制。方法： 用盐酸肾上腺素皮下注射和冰水游泳刺激大鼠，使内源性和外源性肾上腺素共同作用构建大鼠急性微循环障碍模型。ELISA法检测大鼠血清中血管内皮素(ET-1)、P-选择素(P-Selection)、血管内皮生长因子(VEGF)含量，HE染色法观察肺病理形态学变化。结果： 病理形态学显示丹参可以明显改善大鼠微循环障碍及减轻肺部急性损伤，显著减少ET-1、P-Selection、VEGF的含量。结论： 丹参可以改善由盐酸肾上腺素及冰水刺激造成大鼠急性微循环障碍以及减轻肺损伤与通过保护内皮细胞有关。

主题词丹参微循环障碍血管内皮素 P-择素动物，实验大鼠

临床常见疾病可伴发有微循环障碍，其炎症反应及血管内皮损伤引起的微循环障碍已成为肺、肝 、心 、肾等器官功能障碍或结构损伤的重要因素，继而成为患者死亡的重要原因[1-2]，急性微循环障碍发生后，组织细胞会发生多种病理变化，如缺血、缺氧等，其中微血管内皮细胞(VEC)损伤，会改变血液成分与管壁间的关系，使白细胞、血小板等成分黏贴微血管壁[3]，改变微血流状态微血栓形成等一系列后果。对于微循环障碍缺乏特异有效药物治疗。丹参被称为中国红圣人,是唇形科的一员,作为传统中药已广泛用于临床并取得较好疗效，丹参具有“养血活血、活血利水”功效，其有效水溶性成分丹参素与原儿茶醛，丹参素多分布于血液供应丰富的肾、肝、心、脑组织，丹参的药理作用较为广泛，具有利尿、抗炎与抗氧化、降压、降低血黏度作用，实验证明，丹参有增加微循环血流的作用，并能使流动缓慢或瘀滞的血细胞加速流动[4-5]。本文以待探讨丹参改善微循环障碍的效应靶点和效应位点。

1材料与方法

1.1动物及实验方法SD大鼠由第四军医大学实验动物中心提供。4周龄雄性，SPF级饲养，共50只，体质量(180±30) g，将50只SD大鼠随机分为两组，正常组10只，模型组40只，模型组采用腹部皮下注射 0 .1%盐酸肾上腺素0.8 mL /kg。注射完2 h后将大鼠浸入准备好的0 ℃冰水中游泳5 min，连续7 d，观察大鼠精神、毛发、舌质颜色等基本状态，剃耳部毛在微循环仪器检测耳部微小血管血液循环状态确认微循环障碍即血瘀证模型造模成功。其中造模成功的有32只，将造模成功的大鼠随机分为4组，每组8只，即模型组和丹参高、中、低剂量组，正常对照组：生理盐水2 mL/(kg·d)，模型组：生理盐水2 mL/(kg·d)，丹参低、中、高剂量组分别：0.54 g/(kg·d)、1.08 g/(kg·d)、2.16 g/(kg·d)。每日灌胃，连续7 d。

本实验经过第四军医大学道德和伦理委员会批准，符合道德和伦理准则。

1.2药物丹参产自陕西商洛天士力丹参种植GAP基地产唇科植物丹参的根及根茎50kg，加90%乙醇回流1.5 h，滤过，滤液回收乙醇至稠膏；药渣加水煎煮1h，滤过，滤液与上述稠膏合并，减压浓缩滤液至相对密度1.20～1.25，喷雾干燥成粉，蒸馏水溶解，1 g/mL备用，1 g丹参提取0.6 g丹参提取物，提取率为60 %。盐酸肾上腺素注射液由上海乔丰制药有限公司提供。

1.3标本采集与检测给药期满后，予3%苯巴比妥钠腹腔注射麻醉后取静脉血，并取肺组织以备后续实验进行。取左肺的一叶肺组织放入新配4%的多聚甲醛溶液中，石蜡包埋、切片、HE染色，并在光学显微镜下对肺组织病理学改变进行观察并拍照；采用酶联免疫吸附方法(ELISA检测试剂盒，Elabscience)检测ET-1、P-Selection、VEGF的含量评价血管内皮细胞损伤的严重程度。

2结果

2.1肺组织形态学评价正常组肺组织结构正常，肺泡可见肺泡囊结构。与正常组相比较，模型组肺泡壁广泛出现增厚，部分肺泡出现有扩张的现象、坍塌、萎缩，组织血管内有淤血现象。丹参低剂量组与正常组相比较，肺泡壁广泛出现增厚，肺泡间质毛细血管扩张，部分肺泡出现坍塌、萎缩，见有炎性细胞灶性浸润。丹参中剂量组与正常组相比较，肺泡壁广泛出现增厚，部分肺泡扩张、坍塌、萎缩，未见有炎性细胞浸润及毛细血管扩张充血和淤血。丹参高剂量组与正常组相比较，肺泡结构正常，肺泡壁部分出现增厚，肺间质无水肿(图1)。

2.2丹参对微循环障碍大鼠血清ET-1、P-Selection和VEGF含量的影响模型组与正常组比较，ET-1、P-Selection、VEGF含量表达明显增高(P<0.05)，具有统计学意义，与模型组比较丹参低、中、高剂量组各组血清ET-1表达量明显降低(P<0.05)。与模型组比较丹参低剂量血清P-Selection、VEGF表达量未见明显变化，丹参中、高剂量组均可减低P-Selection、VEGF的表达量，在丹参高剂量组中VEGF的表达量下降较其他组更为明显(P<0.05)。(图2-4)。

3讨论微循环对脏器血供与代谢保障、功能维持与协调至关重要。微循环不同程度地参与脏器特殊功能完成，VEC是构成微血管管壁的基本成分之一，具有传递运输、摄取吸附、合成、防栓以及再生功能，VEC结构和功能的完整性是保证血液流动性和物质顺利进行的关键。小动脉、微动脉和毛细血管的结构与功能改变是心血管等疾病形成靶器官损害的重要基础。微循环障碍体现微血管病变、血液流动性改变与血流动力学异常，其中微循环障碍的内皮细胞损伤可改变微血流状态，微血栓形成，使血液“粘稠”而呈现“血瘀证”证的病理表现。

微循环既是控制循环阻力的主要场所，也是高血压形成靶器官损害的主要靶点。由于微循环是高血压病理生理机制的重要基础，故本实验采用了盐酸肾上腺素和冰水泳来复制了物理损伤血管内皮的模型。同时研究也证明，血管内皮功能障碍、血管结构异常是原发性高血压致病的主要因素，微循环障碍既是高血压发病的原因也是结果[6]。本实验中，造模成功后大鼠和未用药模型组肺组织明显损伤，可能与损伤肺部微循环系统的内皮细胞有关，而丹参处理后可以明显减轻肺组织结构的损伤，减轻肺部炎症和瘀血情况，并且随着剂量增加效果尤甚。ET-1主要由血管内皮细胞合成，是一种炎症因子，是目前发现的活性最强的内源性血管收缩肽,有强烈收缩血管的作用[7]，可以作为反映血管损伤程度的一项有力指标，ET-1随着分泌增多而加重血管内皮的损伤，在微循环障碍发展过程中非常重要[8]；P - selection是黏附分子选择素家族主要成员之一，是内皮细胞和血小板活化的重要标志[9]，参与机体炎症反应及血栓形成等多种病理过程，的高表达反映血管内皮细胞被激活或损伤[10-11]； VEGF对于肺脏的生长发育和正常生理功能的维持以及抗损伤修复具有重要作用，微循环障碍时内皮细胞损伤分泌大量VEGF[12]。本实验研究证实丹参可减少ET-1含量，调节血管舒缩平衡；丹参减少P-Selection的表达，减少炎症介质对内皮细胞的黏附以及减少VEGF的表达，在减轻肺部炎症细胞浸润的同时可保护肺组织结构完整性。

活血化瘀利水药物丹参除改善血液循环异常外，还可通过保护血管内皮细胞改善微循环循环障碍来完成其活血化瘀作用。其“养血活血利水”功效体现于减轻VEC损伤，保护VEC并改善微血管功能，从保护微血管、改善微循环、治疗急性肺损伤等角度提供了新的思路并揭示了丹参保护内皮细胞可能是减轻急性肺损伤的机制之一，同时也为丹参的临床应用奠定了理论基础。

参考文献

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(收稿2015-10-17；修回2015-11-08)

The protective effect of Salvia miltiorrhiza on the acute microcirculation disturbance mice vascular endothelial cells

Xijing Hospital,Forth Military Medical University(Xi'an 710032)

Chen YaoWang ShengjuanLi Chaolinget al

ABSTRACTObjective： Research the protective effect and molecular mechanism of Salvia miltiorrhiza on the acute microcirculation disturbance mice, which caused by epinephrine hydrochloride and Ice water stimulation. Methods: With hydrochloride adrenaline subcutaneous injection to the mice and ice water swimming stimulation to the mice, mice acute microcirculation disturbance model can be built by Endogenous and exogenous adrenaline work together. The method of ELISA detected the content of ET-1. P-Selection and VEGF in the serum of mice. Lung tissue was stains with Hematoxylin-eosin to observe the Pathomorphology. Results: Pathomorphology showed that Salvia miltiorrhiza can improve microcirculation disturbance mice and relieve Acute lung injury obviously, and highly reduce the content of ET-1、P-Selection、VEGF. Conclusion：It has the connection with protecting the endothelial cells that salvia miltiorrhiza can improve the mice acute microcirculation disturbance and reduce lung injury, which caused by epinephrine hydrochloride and Ice water stimulation.

KEY WORDSSalvia miltiorrhiza Microcirculation disturbance Endothelin P-SelectionVascular endothelial growth factorExperiments AnimalsRats

【中图分类号】R331.35

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.04.061

*国家自然科学基金项目(81273622)

△通讯作者