通脉舒络合剂质量标准研究*

王林凤　康　毅　魏国玲

陕西中医药大学附属医院( 咸阳 712000)



·方药纵横·

通脉舒络合剂质量标准研究*

王林凤康毅魏国玲

陕西中医药大学附属医院( 咸阳 712000)

摘要目的：确立通脉舒络合剂质量控制标准。方法：色谱柱：ThermoC18(250mmX4.6mm,5μm)；流动相：乙腈—0.1%磷酸溶液(14:86)；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：230nm；用薄层色谱法(TLC)对黄芪、赤芍、水蛭、当归、川芎进行鉴别研究；用高效液相色谱法(HPLC)测定通脉舒络合剂中芍药苷浓度。结果：TLC和 HPLC中成分无干扰；芍药苷浓度在0.246μg～1.32μg范围内有良好线性关系(r=0.999 9)，平均回收率为100.5%，RSD=1.08%。结论：鉴别和含量测定方法可靠、结果准确、专属性强，能有效控制通脉舒络合剂质量。

主题词通脉舒络合剂芍药苷色谱法，高压液相

通脉舒络合剂是国医大师张学文教授治疗脑病经验方，由多味中药经提取制成的纯中药制剂，具有益气活血，化瘀通络功效。该组方在二十世纪七十年代末被制成通脉舒络输液剂，应用于临床，主治脑血栓形成，脑出血恢复期，疗效确切。在原输液剂处方基础上加味制成了通脉舒络合剂，运用于临床，疗效满意，原质量标准只有性状和检查项。为更进一步控制其质量，保证疗效，对黄芪、赤芍、水蛭、当归、川芎进行了薄层鉴别研究；对赤芍中主要有效成分芍药苷进行定量测定研究，建立了通脉舒络合剂定性和定量标准，为其控制质量提供有效依据。

1材料

1.1仪器设备日本岛津LC-2010AHT型高效液相色谱仪(四元泵)；SPD-10A(V)VP紫外检测器；色谱柱ThermoC18(250mmX4.6mm,5μm)；KQ-3200E超声清洗仪；METLER AE-240电子分析天平；PHS-3C型PH酸度计。

1.2对照药材当归、川芎、赤芍由中国药品生物制品检定所提供。

1.3对照品芍药苷、黄芪甲苷由中国药品生物制品检定所提供。

1.4通脉舒络合剂本院制剂室提供。

1.5试剂乙腈、甲醇为色谱纯；水为注射用水；其它为分析纯。

2方法

2.1性状本品为棕褐色液体，气微腥，味微苦、涩。

2.2检查

2.2.1 pH值：在室温下测定，pH值范围为5.0～7.0 。

2.2.2相对密度：在室温下测定，相对密度范围为1.08～1.15 。

2.2.3其它：应符合合剂项下有关各项规定(《中国药典》2010年版附录ID)。

2.3定性鉴别

2.3.1 黄芪的鉴别：取本品30mL，先用水饱和的正丁醇提取3次(30mL/次)，3次正丁醇液合并；然后用氨试液洗2次(30mL/次)；再用正丁醇饱和的水洗涤2次(20mL/次)，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，制成供试品溶液，并同法制成缺黄芪的溶液。取黄芪甲苷对照品10mg，置10 mL量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度成为对照品溶液(1mg/mL)。依照薄层色谱法试验依法操作，见图1。

1-黄芪甲苷对照品；2、3、4-供试品；5-缺黄芪的阴性对照点样量：5μL 展开剂：氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置12h以上的下层溶液显色剂：10%硫酸乙醇溶液结果：阳性对照斑点清晰，阴性无干扰

图1黄芪TLC图谱

2.3.2赤芍鉴别:取本品30mL，加水饱和正丁醇萃取2次(20mL/次)，正丁醇用水洗涤2次(20mL/次)，水浴蒸干后用2mL甲醇溶解成供试品溶液，按上述方法制成缺赤芍的对照溶液。取赤芍对照药材2.4g，用30mL乙醇，浸泡4h，超声30min，滤液挥干，用甲醇1mL溶解成对照药材溶液。另取芍药苷10 mg，置10mL量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度成对照品溶液(1mg/mL)。依照薄层色谱法试验依法操作，见图2。

1、2-供试品；3-赤芍药材对照；4-芍药苷对照品；5-缺赤芍的阴性对照点样量：5μL展开剂：氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液(8∶1∶4∶1)显色剂：5%香草醛硫酸溶液结果：阳性对照斑点清晰，阴性无干扰

图2赤芍TLC图谱

2.3.3水蛭鉴别:取本品10mL，加乙醇20mL，超声30min，过滤液为供试品溶液，按上述方法制成缺水蛭的溶液。取水蛭对照药材1.0g，按上法制成对照药材溶液。依照薄层色谱法操作，见图3。

1-缺水蛭的阴性对照；2-水蛭药材对照；3、4-供试品点样量：5μL展开剂：环己烷-乙酸乙酯(4∶1)显色剂： 10%的硫酸乙醇溶液结 果：阳性对照斑点清晰，阴性无干扰

图3水蛭TLC图谱

2.3.4川芎鉴别[1-2]：取本品30 mL，加乙醚萃取2次(30mL/次)，把乙醚液挥干后用1mL乙酸乙酯溶解成为供试品溶液，同法制成阴性对照溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醚15mL，浸渍4h以上，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验依法操作，见图4。

1-川芎药材对照； 2、3、4-供试品；5-缺川芎的阴性对照点样量：2μL展开剂：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(9∶1)检 视：365nm紫外光灯下结 果：阳性对照斑点清晰，阴性无干扰

图4川芎TLC图谱

2.3.5 当归薄层色谱鉴别：取本品30mL，加乙醚萃取2次(25mL/次)，乙醚液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，制成供试品溶液，按照上述方法制成缺当归的溶液。取1g当归对照药材，用15mL乙醚，超声15min，依照上法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验依法操作，见图5。

1、 2-供试品 3-当归药材对照 4-缺当归的阴性对照点样量：3μL展开剂：环己烷-乙酸乙酯(4∶1)检 视：365nm紫外光灯下 结 果：阳性对照斑点清晰，阴性无干扰

图5当归TLC图谱

2.4芍药苷的含量测定

2.4.1 实验条件流动相：乙腈—0.1%磷酸溶液(14:86)；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：230nm；测定量：10μL；理论板数应不低于3 000。

2.4.2 芍药苷对照品溶液制备:取芍药苷对照品66.0 mg，置20 mL量瓶中，加20%甲醇溶解定溶至刻度，再精取1mL置5 0mL量瓶中定溶至刻度制成对照品溶液，即得。

2.4.3 样品溶液的制备：精取样品10mL，置有塞子的锥形瓶中，精加50mL甲醇，盖塞，称重量，然后超声20min，取出放冷，再称定其重量，用稀释剂补足减少的重量，摇匀后过滤，精取续滤液10mL，水浴蒸干后用20%甲醇定溶至10mL，滤过，取续滤液即得。

2.4.4 阴性溶液制备：精密量取缺赤芍的制剂10mL，按样品溶液制备方法制得缺赤芍的对照溶液。

2.4.5 分析方法：分别取芍药苷对照品、样品和阴性对照溶液，过滤，进样分析，记录色谱图6、7、8。

通过在以上上述色谱条件下实验，缺赤芍的对照溶液对芍药苷成分的测定无干扰。

2.4.6 线性考察：吸取芍药苷对照品溶液进样，依次进样4μL，8μL，10μL，12μL，16μL，20μL，测峰面积，以峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归，得方程A=2 124 361.8C+38 609.71(r=0.999 9)。表明样品溶液在0.264μg～1.32μg范围内线性关系良好。

2.4.7 精密度考察：吸取对照品溶液连续进样6次，测其峰面积,得RSD为1.07%，显示精密度良好。

2.4.8 稳定性考察：取供试品溶液，分别在0，4，6，8，12，16h测定,RSD为0.38%，表明供试品溶液在16h内稳定性较好。

2.4.9 回收率试验：精密量取已知浓度样品9份，每份1mL，将9分样品分成3组，每组加入芍药苷对照品溶液分别为1mL、2mL、3mL，测定回收率，见表1。

表1　芍药苷加样回收率测定结果(n=9)

2.4.10 样品含量：取各批号样品按“2.4.1”项下条件测定，计算芍药苷含量。批号20140521,20140522,20140523分别为0.35mg·mL-1, 0.36mg·mL-1,0.34mg·mL-1。

3讨论

3.1本品是一个中药复方制剂，药味多，化学成分复杂，影响鉴别干扰因素多，要想得到理想的色谱图谱，需要经过前处理才能实现。本研究通过多次实验，对方中黄芪、赤芍、水蛭、当归、川芎得到了较好薄层鉴别；考虑到当归、川芎含有相同化学成分，为能在一块板上同时进行展开，曾实验多种提取方法和展开剂，如石油醚(30～60℃)-三氯甲烷-三乙胺(6∶2∶0.5)[3]、

苯-冰醋酸-甲醇(30∶1∶3)[4]等均未能达到理想效果。

3.2在当归药材薄层色谱鉴别时，分别用了正己烷-乙酸乙酯(9∶1)[5]、环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，两者均能分离出清晰斑点，鉴于正己烷比环己烷毒性大，对人体危害严重，故用环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂。

3.3在质量浓度测定实验中，本想测定黄芪甲苷、芍药苷，但由于黄芪甲苷属四环三萜类皂苷，在紫外区201nm波长处有弱的末端吸收。用UV-HPLC法干扰大，ELSD-HPLC比较适合之，而我们实验条件达不到，只能测定后者的有效成分作为定量指标。

3.4经3批样品中芍药苷测定，芍药苷浓度在0.34 mg·mL-1～0.36mg·mL-1，考虑到实际生产中通脉舒络合剂药材来源，以及提取纯化过程、储藏环境等因素影响，故暂定本品：每1mL含芍药苷不得少于0.30mg。

参考文献

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[2]孙相民.颈痛胶囊质量标准的研究[J].中国实用医药，2010，19(5)：23-24.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：1196.

[4]谢仲德，方应权，李文烈，等.当归调经胶囊的薄层鉴别与阿魏酸、芍药苷的测定[J].中成药，2013，35(2)：427-430.

[5]吴和珍，何再安，陈进文，等.活血通络片的质量标准研究[J].中成药，2007，27(11)：1603-1604.

(收稿2015-11-13；修回2015-12-16)

【中图分类号】R285.6

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.04.055

*陕西中医药大学附属医院科研基金项目(2014-27)