山西地区汉族人Graves病与PARP-1、STAT4基因多态的关联研究

赵静雅，梁文芳，贺美芳，王芳，兰丽珍山西医科大学，山西太原　030001



山西地区汉族人Graves病与PARP-1、STAT4基因多态的关联研究

赵静雅，梁文芳，贺美芳，王芳，兰丽珍
山西医科大学，山西太原030001

［摘要］目的该实验通过对山西地区汉族人Graves病（GD）的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）和信号转导和转录激活因子4（STAT4）基因多态性检测，旨在从基因水平评估其在GD发病机制中的作用。方法用聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性（PCR-RFLP）和基因测序方法分别对2015年4—7月流调人群中61例GD患者和50例健康人的PARP-1基因的1672位点和STAT4基因的rs7574865位点进行基因型分析，比较两组的基因型和基因频率。结果PARP-1基因G1672A的GG型病人患GD病的风险有2.3倍高，基因频率的比较，GD病患者的G频率风险是正常对照组的1.452倍。通过测序回报结果，GD患者rs7574865的基因频率T是健康对照组的1.744倍。结论Graves病与PARP-1、STAT4基因多态性有关。

［关键词］Graves病；聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1和信号转导和转录激活因子4；多态性

Graves病（GD）又称弥慢性毒性甲状腺肿，是甲亢中最常见的类型，占85％～90％。近年来，GD的研究取得了很大的进展，其发病机制今仍未阐明。PARP-1增加使淋巴B细胞产生自身抗体的细胞因子，这种被认为和GD的发病机制有很大关系［1］。调查关于自身免疫疾病和STAT4基因多态性，许多研究表明STAT4基性和自身免疫疾病如系统性红斑狼疮，风湿性关节炎，克罗恩病有关系，因此预示着在大量自身免疫病有相同基因。该实验拟对GD人群及健康人群基因多态性的检测，探讨是否为山西地区汉族人GD易感性因素。GD组61例，对照组50例，GD组和健康组来自山西医科大学第一医院内分泌科2015年4—7月流调人群。

1　对象与方法

1.1研究对象

GD组诊断符合：①甲状腺功能亢进（甲亢）的临床症状、体征；②触诊时弥漫性对称性甲状腺肿大，质地较坚实；③实验室检查甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）及促甲状腺激素受体抗体（TRAb）阳性，I131摄碘率增高；④甲状腺超声检查显示甲状腺对称性肿大。对照组同样来自流调人群中。所有入选的研究对象均排除近期有感染史、女性妊娠、严重并发症、合并其它自身免疫性疾病史，成员之间有血缘关系。GD组61例，男16例，女45例，对照组50例，男13例，女37例，GD组来自山西第一医院内分泌科2015年4—7月流调人群中GD患者，年龄18～79岁，平均年龄（41±10）岁。两组性别年龄差异无统计学意义，所有研究实验通过伦理委员会的批准及受试者均签署了书面知情同意书。

1.2实验方法

标本采集：所有研究对象均采集空腹静脉血2 mL，用EDTA抗凝，保存于-80℃。

外周静脉血DNA的提取用全血DNA提取试剂盒提取DNA，提取好的DNA存放于-20℃保存。

PCR扩增目的基因PARP-1G1672A基因上游引物5-GCGAGACCCTGTCCCTAA-3，下游引物5-TCCCCCTTTTATTTTTGAGACTG-3。STAT-4rs757486基因上游引物：5-AGTATGAAAAGTTGGTGAC-3，下游引物：5-AATCCCCTGAAATTCCACTG- 3，反应体系50 μL，包括：上下游引物各1 uL（20 μM），PrsmixTaqPCR25 μL，DNA模板（浓度为100 ng/μL）5 μL，ddH2O 18 μL，扩增产物于2％琼脂糖电泳检测。

PCR产物进行基因型分析：PARP-1基因的PCR扩增产物于37℃下在10 U的sh1236I孵育过夜，酶切产物在2％的琼脂糖电泳下进行基因型鉴定。STAT-4基因的PCR扩增产物送于基因公司进行测序，收集的原始数据用GeneMapper来分析。

1.3统计方法

确定GD组和正常对照组基因频率是否符合Hard-Weinberg遗传平衡法则，并利用SPSS17.0统计软件进行数据处理，计数资料采用基因直接计数法计算，各组间基因型及等位基因频率比较采用四格表Χ2检验。用比值比（OR）表示相对风险度。

2　结果

PARP-1基因G1672A的GG型患者患GD病的风险有2.3倍高（P=0.04），基因频率的比较发现，GD病患者的G频率风险是正常对照组的1.452倍。通过测序结果，GD患者rs7574865的基因频率T是健康对照组的1.744倍（P=0.047＜0.05），见表1。

表1　

3　讨论

PARP-1是一种核多功能酶和染色质相关蛋白，它有113 kD重被1q41q42染色体区域编码，PARP-1基因有23个外显子。研究［2］表示SNPs（5q31-33）负责细胞因子（IL-3，IL-4，IL-5），可能是GD的危险因素。最近关于炎症相关疾病的提出PARP-1的大鼠现实PARP-1阻滞剂可以阻止疾病的发展和过程［3］，PARP-1组实际的保护作用是通过阻滞炎症，说明PARP-1在炎症是非常作用，并且通过调节转录因子来调节炎症表达的［4］，越来越多的出版物表明，在SNPs和自身免疫性疾病的发病机制有很大关系［5］，SNP的促进区，基因多态性可能影响了基因转录，该研究发现，对于G1672A基因多态性，GG型患者和携带G碱基的一组人容易有GD，有GG和G的患者是2.3和1.452倍，可以推断出GA型对疾病有保护作用。信号转导和转录激活因子4 （STAT4）基因，位于人染色体2q32.3，包括一个横跨120

kb区域的外显子。STAT4基因传导转录通过INF，IF-12，IF-15转录的［6］同时STAT4在引导T分化Th1细胞的IL-12分化因子有重要作用，并且通过Th17细胞参与的产生。目前人类证据表明STAT4涉及Th1或Th17为中介的疾病，并且和大量自身免疫疾病有相的易感基因，提供了调查GD的原因，在这个实验首次提供了STAT4在山西人群组中的基因型。Rs7574865，位于STAT4的第3个区域，已经被确定增加RA，SLE，T1D，Grons病和Behcet病风险。一项韩国研究表明［7］T基因频率的GD患病率更高，其GD患者STAT4rs7574865基因频率T风险率为2.01倍（P＜0.05），而该实验为1.744倍（p= 0.047），结果与该实验结论相符。综上所述，Graves病与PARP-1、STAT4基因多态性有相关性。［8］这为我们从基因水平进一步探讨GD发病机制提供了思路。由于疾病发生涉及基因和环境共同影响，该实验只是初步研究，我们应该继续扩大样本量，在更多的地区和种族间进一步验证。

［参考文献］

［1］马学芹.Medical Recapitulate，2013，19（8）：1386-1388.

［2］寿砚芸.Graves病患者血清IL-3、IL-2、sIL-2R的表达研究［D］.杭州：浙江大学，2012.

［3］张腾，王翠玲，张宁，等.PARP-1抑制剂研究进展［J］.中国新药杂志，2014（7）：793-801.

［4］曹春伟.自身免疫病易感基因与致病突变遗传学分析［D］.北京：中国科学院北京基因组研究所，2013.

［5］殷健.中国汉族人群类风湿关节炎与强直性脊柱炎的分子流行病学研究［D］.上海：第二军医大学，2014.

［6］黄纯美.中药喘可治注射液对COPD大鼠IL-12/STAT4、IL-4/STAT6信号通路影响研究［D］.广州：广州中医药大学，2014.

［7］Bi C，Li B，Cheng Z，et al.Zhai，A.Association study of STAT4 polymorphisms and type 1 diabetes in Northeastern Chinese Han population［J］.Tissue Antigens，2013，81，137-140.

［8］张薇，杨林花.STAT4多态性与自身免疫性疾病相关性研究进展［J］.中国免疫学杂志，2014（1）：141-144.

Research on Correlation between the Graves Disease in the Han Chinese of Shanxi Area

ZHAO Ya-jing，LIANG Wen-fang，HE Mei-fang，WANG Fang，LAN Li-zhen
Shanxi Medical University，Taiyuan，Shanxi Province，030001 China

［Abstract］Objective To evaluate the effect of the poly（adp-ribose）polymerase-1（PARP-1），signal transduction and activating transcription factor（STAT4）gene polymorphism in the GD pathogenesis by detecting them in Graves disease in the han Chinese of Shanxi area. Methods The 1672 loci in PARP-1 genes and rs7574865 loci in STAT4 genes from 61 cases of GD patients and 50 healthy cases in the epidemiological population from April 2015 to July 2015 were given genotyping according to the polymerase chain reaction- restriction fragment length polymorphisim and genetic sequencing method，and the genotype and gene frequency were compared between the two groups. Results The risk of suffering from GD disease of GG type PARP-1 patients with G1672A gene was 2.3 times as high as that of the normal control group，in terms of the gene frequency，the G frequency risk of the patients with GD disease was 1.452 times as high as that of the normal control group，the sequencing results showed that gene frequency T of rs7574865 in GD patients was 1.744 times as many as that of the normal control group. Conclusion There is a correlation between the Graves disease and PARP-1 and STAT4 gene polymorphism.

［Key words］Graves disease；Poly（adp -ribose）polymerase -1（PARP -1），signal transduction and activating transcription factor；Polymorphism

［中图分类号］R5

［文献标识码］A

［文章编号］1674-0742（2016）05（b）-0054-03

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.14.054

［基金项目］甲状腺疾病和碘营养状况的山西调查（2014011043-4）。

［作者简介］赵静雅（1989.4-），女，山西太原人，硕士，在读研究生，研究方向：糖尿病和甲状腺疾病。

［通讯作者］兰丽珍（1970-），女，山西太原人，博士，主任医师，教授，主要从事糖尿病和甲状腺疾病工作。

收稿日期：（2016-02-26）