产碱性淀粉酶重组枯草芽孢杆菌的构建与发酵优化

王静丽，刘松，堵囯成*，2，陈坚，2（.江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡2422；2.食品科学与技术国家重点实验室，江南大学，江苏无锡2422）

产碱性淀粉酶重组枯草芽孢杆菌的构建与发酵优化

王静丽1，刘松1，堵囯成*1，2，陈坚1，2
（1.江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡214122；2.食品科学与技术国家重点实验室，江南大学，江苏无锡214122）

碱性淀粉酶催化淀粉在碱性环境中高效降解，广泛应用于纺织退浆、洗涤、制药等领域。通过信号肽筛选，将来源于嗜碱单胞菌Alkalimonas amylolytica的碱性淀粉酶基因于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB600实现分泌表达，并优化了重组菌产酶的发酵条件。在最佳信号肽ywbN介导下，重组B.subtilis发酵51 h，胞外AmyK酶活最高达146.86 U/mL，且能在发酵上清液中检测到与AmyK理论相对分子质量（60 kDa）一致的蛋白质条带。通过单因素实验优化了发酵培养基（糊精32 g/L，蛋白胨12 g/L，酵母粉24 g/L，KH2PO42.32 g/L，K2HPO4·3H2O 16.43 g/L），并在发酵24 h后添加0.2 g/dL Na2CO3调节发酵液pH，发酵72 h胞外AmyK酶活达640.33 U/mL，较优化前提高了336%，是目前已报道重组B.subtilis产碱性淀粉酶的最高水平。研究结果为AmyK发酵生产的工业化提供了数据支撑。

碱性淀粉酶；信号肽；重组枯草芽孢杆菌；发酵优化；碳酸钠

α-淀粉酶（EC3.2.1.1）催化淀粉、糖原等分子中α-1，4-糖苷键水解，生成糊精、麦芽寡糖、麦芽糖和葡萄糖等产物［1-2］。在碱性条件下，能高效完成上述催化反应的α-淀粉酶即为碱性淀粉酶，一般产自嗜碱微生物，稳定pH范围为9.0～11.0［3-6］。碱性淀粉酶广泛应用于纺织退浆、洗涤剂添加、淀粉加工、医药生产等领域［7-8］。

通过发酵法高效生产碱性淀粉酶已成为国内外研究者关注的热点。……