毕赤酵母X33/pGAPZαA-MLcc1产漆酶的高密度发酵

黄亮，刘逸寒，刘晓光，李玉，路福平*（.工业发酵微生物教育部重点实验室，天津市工业微生物重点实验室，国家工业酶工程实验室，天津科技大学生物工程学院，天津300457；2.天津农学院农学与资源环境学院，天津300384）

毕赤酵母X33/pGAPZαA-MLcc1产漆酶的高密度发酵

黄亮1，2，刘逸寒1，刘晓光1，李玉1，路福平*1
（1.工业发酵微生物教育部重点实验室，天津市工业微生物重点实验室，国家工业酶工程实验室，天津科技大学生物工程学院，天津300457；2.天津农学院农学与资源环境学院，天津300384）

在5 L的发酵罐中进行了重组毕赤酵母X33/pGAPZα A-MLcc1表达重组漆酶的发酵试验，漆酶活性的变化趋势与菌体干质量变化趋势相一致，当菌体增长进入稳定期46 h左右时，产酶达至高峰47.2 U/L。进一步研究了工程菌在5 L容积发酵罐中的高密度发酵工艺，并获得了高水平表达漆酶的优化策略：在补料阶段采用溶氧反馈控制方式，并且保持溶氧水平在15～30 g/dL，发酵过程中通过在线补加氨水和盐酸来调整pH恒定在5。通过高密度发酵可获得最高酶活力达216.3 U/L，是分批发酵获得最高酶活力的4.6倍。

毕赤酵母；漆酶；高密度发酵

漆酶具有特异的催化性能和宽泛的底物范围，从而在国民经济的多个领域如纺织业废水处理、纸张和纸浆的低污染生产、芳香族化合物转化，生物传感器、生物燃料电池的制造，以及饮料加工、食药用菌生产、食品保护等均有广阔的应用前景，但漆酶的低产量、高温易失活等又使其应用不能深入推广［1］。

白腐菌是真菌中漆酶主要的生产者，但培养过程周期较长，容易被污染而不利于工业化生产，解决酶源问题的一个重要方法就是通过漆酶的异源表达实现漆酶生产低成本的目标［2-4］。……