miR—148b对肝癌SMMC7721细胞衰老的影响

张军港 石英 黄东胜 张成武 洪德飞

[摘要] 目的 探讨miR-148b对肝癌SMMC7721细胞衰老的影响。 方法 分别使用50 nmol/L的miR-148b mimics（miR-148b）和negative control（miR-NC）转染肝癌SMMC7721细胞48 h后，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-148b表达的变化。通过β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老的变化，应用western blot检测P21表达的影响。 结果 与对照组相比，miR-148b能明显增加肝癌SMMC7721细胞中miR-148b的表达。50 nmol/L的 miR-148b转染SMMC7721细胞48 h后，细胞形态变得大而扁平，衰老细胞比例明显增加[（9.67±2.08）% vs （43.67±3.51）%，P<0.01]。miR-148b使肝癌细胞P21蛋白的表达也明显增加。 结论 miR-148b可能通过影响P21的表达促进肝癌SMMC7721细胞的衰老，miR-148b有可能成为肝癌SMMC7721细胞生物治疗的新靶点。

[关键词] 肝癌；miR-148b；衰老；P21

[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）05-0025-04

microRNAs是一类长度为20～24 bp、具有基因调控功能的非编码小分子RNA，主要通过影响mRNA的稳定及翻译调控基因表达功能[1]。大量研究发现，microRNAs在细胞增殖、分化、凋亡、衰老等多种生物学过程中发挥重要的作用[2-4]。miR-148b在多种肿瘤中异常表达，与肿瘤的生物学功能及预后密切相关。前期研究结果发现miR-148b在肝癌组织和细胞中低表达，与肝癌的增殖侵袭密切相关[5，6]，目前miR-148b对肝癌细胞衰老的影响机制尚不清楚。本研究在2013年10～12月将50 nmol/L的miR-148b的类似物转染肝癌SMMC7721细胞48 h后，观察对细胞衰老特性及衰老相關蛋白P21的影响，为探讨miR-148b作为肝癌治疗靶点提供基础依据。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般材料

RPMI1640培养基和胎牛血清购自美国Gibco BRL公司， 肝癌细胞系SMMC7721购自中国科学院上海细胞库。衰老相关β-半乳糖苷酶染色试剂盒购自碧云天生物有限公司。miR-148b mimics（miR-148b）和negative control（miR-NC）转染试剂盒购自广州锐博生物技术有限公司。LipofectmanineTM2000及Trizol试剂均购自美国Invitrogen公司。兔抗人P21和GAPDH一抗购自美国 Santa Cruz公司，辣根过氧化物酶结合的二抗购自武汉博士德公司。

1.2 方法

1.2.1 常规细胞培养 肝癌SMMC7721细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，在37℃、含5%CO2培育箱下常规培养。……