流式细胞术检测IgD与IgD受体结合实验方法的建立

陈恒石，吴育晶，黄 琼，陈文生，董 进，魏 伟

流式细胞术检测IgD与IgD受体结合实验方法的建立

陈恒石，吴育晶，黄 琼，陈文生，董 进，魏 伟

目的 建立非放射性荧光标记的配体受体结合实验，检测IgD与其受体结合的作用特性。方法 以配体受体结合理论为基础，利用荧光标记抗体技术，建立非放射性配体受体结合实验方法。利用流式细胞术检测人CD4+T细胞和人滑膜细胞上IgD与IgD受体结合的亲和力。结果 人CD4+T细胞上IgD与IgD受体结合的解离常数（KD）和受体最大结合容量（Bmax）分别是8.10×10-10mol/L和6 605相对值/104细胞，人滑膜细胞上IgD受体与IgD结合的KD和Bmax值分别是7.02×10-10mol/L和5 977相对值/104细胞。结论 该方法避免了传统受体与配体结合分析中放射性标记的问题，操作简便、稳定性好、灵敏度及选择性均较高，可为分析配体受体结合提供新的方法。

配体受体结合；亲和力；IgD；荧光标记

免疫球蛋白D（immunoglobulin D，IgD）作为一类免疫球蛋白，一方面可作为B细胞表面受体（B cell receptor，BCR）发挥免疫功能，另一方面可以作为配体与其受体（IgD receptor，IgD-R）结合激活下游信号通路［1］。在病理状态下，IgD与IgD-R的过度结合，可能导致自身抗体生成增多、自身免疫反应增强，从而介导自身免疫疾病的发生。目前，相关研究仅确定了IgD-R分布以及表达量，IgD-R的编码基因和分子结构尚不明确，IgD与IgD-R特异性结合后产生的相关作用及机制更是了解甚少［2］，因此，IgD与其受体结合的动力学参数是研究IgD和IgD-R特性的基础性环节。受体动力学特性的检测主要通过配体受体结合实验，该方法考察的是受体与配体结合能力，而非受体的功能，且不涉及受体信号通路研究。……