肠出血性大肠杆菌z4832基因缺失突变株的构建

谭林林，王建新，李 涛，王 慧

肠出血性大肠杆菌z4832基因缺失突变株的构建

谭林林1，2，王建新2，李 涛2，王 慧1，2

目的 利用Red重组系统的同源重组功能，敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7（EHEC O157∶H7）的乙酰转移酶基因z4832，构建z4832基因缺失突变株。方法 EHEC O157∶H7的基因组作为模板，PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列；将上下游同源臂连接于pUC19-kana质粒上卡那霉素（kana）抗性基因的两端；PCR扩增获得中间嵌合卡那霉素抗性基因的同源臂线性片段，利用质粒pKD46介导的重组技术敲除z4832基因，利用pCP20质粒介导的重组技术去除抗性标记。PCR扩增及DNA测序验证目的基因缺失后，测定突变株及野生株的生长曲线，检测在抗菌药物氧氟沙星中的存活率。结果 成功构建EHEC O157∶H7 z4832基因缺失突变株。z4832缺失突变株生长速度与野生株差异无统计学意义，但在含氧氟沙星的LB培养基中突变株存活率升高（P＜0.05），在含氧氟沙星的M9培养基中存活率下降（P＜0.05）。结论 构建z4832缺失突变株，研究z4832与肠出血性大肠杆菌耐药性之间的关系，为进一步研究乙酰转移酶在EHEC O157∶H7中的作用机制奠定了基础。

肠出血性大肠杆菌O157∶H7；Red重组系统；乙酰转移酶；抗生素

肠出血性大肠杆菌（EHEC）是主要的食源性致病菌之一，通过粪便或屠宰过程污染饮水和肉类及其他食品，并且可以在水果蔬菜中长期存活［1］。由其引发的食物中毒在世界各地均有过暴发流行［2］。人感染该病原菌后可引发溶血性尿毒综合征（heomlytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症［3］。生物信息分析结果显示EHEC O157∶H7基因组中z4832基因所编码蛋白为乙酰转移酶。……