黔产莪术和种子中提取挥发油的具体成分异同比较＊

许政旭，朱诗国，罗 俊，潘年松，刘英波

药 学

黔产莪术和种子中提取挥发油的具体成分异同比较＊

许政旭，朱诗国，罗 俊＊，潘年松，刘英波

目的 研究黔产莪术和莪术种子中挥发油质控成分的检定方法与含量范围。方法 建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定黔产莪术与莪术种子中吉马酮和呋喃二烯含量方法：色谱柱为C18（4．6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0～20 min，60%A～95%A；20～35 min，95%A），流速为1 ml／min，检测波长为216 nm，柱温35℃，进样量10 μl。结果 吉马酮和呋喃二烯的检测浓度分别在4．18～83．6 μg／mL（r=0．9999），10．21～204．2 μg／ml（r=1．0000）范围呈现良好的线性关系；吉马酮和呋喃二烯的平均回收率 （n=6）分别103．2%（RSD=1．44%，102．2%（RSD=1．28%），重复性实验（n=6）RSD分别为0．90%，2．10%。结论 黔产莪术与莪术种子中提取的挥发油的质量，可以用挥发油中所含吉马酮和呋喃二烯含量进行控制。控制范围是：黔产莪术挥发油中吉马酮，呋喃二烯含量依次是85．87%～100．10%，59．07%～78．92%；黔产莪术种子挥发油中吉马酮，呋喃二烯含量依次是65．69%～80．47%，59．94%～68．41%。

HPLC；黔产莪术；黔产莪术种子；挥发油；吉马酮；呋喃二烯

黔产莪术和莪术种子来源于四川崇州引种的莪术种子，由遵义绿普森农业有限公司在遵义市湄潭县种植并提供研究用样品，经遵义市食品药品检验所鉴定为广西莪术（Curcuma Kwangsiensis S．G．Lee et C．F．Liang）种，黔产莪术和莪术种子为同株异位：其根茎中的主根（大头）是黔产莪术，侧根（二头、三头、奶头）是种子；须根末端膨大的块根是黔产郁金。本文对黔产莪术和莪术种子经水蒸气蒸馏法提取的挥发油进行进一步定量研究，建立了同时测定黔产莪术和莪术种子挥发油中吉马酮和呋喃二烯2种有效成分的高效液相色谱法，并检定黔产莪术和莪术种子挥发油中吉马酮和呋喃二烯含量。报告如下。

1 材料与方法

1．1 实验材料Agilent 1100系列高效液相色谱仪（G1379A脱气机，G1316A柱温箱，G1311A四元梯度泵，G2171A自动进样器，G1313A二极管阵列检测器）和Agilent Chemstation工作站；TB-215D型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

呋喃二烯对照品，供含量测定用99．4%计，中国药品生物制品检定所，批号：111824-210002；吉马酮对照品，供含量测定用99．8%计，中国药品生物制品检定所，批号：111665-201103；乙腈为色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司 （批号：20150112）；水为娃哈哈纯净水；无水乙醇为分析纯；黔产莪术和种子挥发油样品（自制）来源信息见表1。

表 1 莪术油样品来源信息

1．2 方法

1．2．1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18（4．6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0～20 min，60%A～95%，20～35 min，95%A）；流速：1 ml／min；检测波长：216 nm；柱温：35℃；进样量：10 μl；对照品及样品色谱图见图1。

图 1 对照品（A）及样品（B）HPLC色谱图

1．2．2 溶液的制备 （1）对照品溶液的制备。分别精密称取吉马酮和呋喃二烯适量，至10 ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为0．418 mg／ml，1．021 mg／ml的混合对照品溶液。（2）供试品溶液的制备。精密称取莪术油0．1 g于50 ml量瓶中，加无水乙醇定容，摇匀，精密量取5 ml至25 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0．45 μm）滤过，取续滤液。

2 结果

2．1 标准曲线的绘制精密量取对照品的溶液适量，吉马酮和呋喃二烯分别配成浓度为4．18～83．6 μg／ml，10．21～204．2 μg／ml的系列溶液，并按色谱条件分别进样10 μl，记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标进行线性回归，得吉马酮和呋喃二烯的回归方程分别为：Y=24．891X+30．217（r= 0．9999）；Y=26．132X+75．118（r=1．0000）

2．2 精密度试验分别精密吸取对照品溶液吉马酮（33．44 μg／ml）和呋喃二烯（81．68 μg／ml）各10 μl，按色谱条件重复进样6次，测定吉马酮和呋喃二烯的峰面积，结果分别为RSD=0．41%（n=6），RSD= 0．17%（n=6），表明仪器精密度良好。

2．3 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液（编号001）10 μl，制备后0，2，4，8，12，18，24 h进样，吉马酮和呋喃二烯峰面积的RSD分别为0．16%，1．00%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2．4 重复性实验取同一批样品，共6份，制备供试品溶液，按色谱条件进样测定，分别计算含量和RSD，吉马酮和呋喃二烯的平均含量（n=6）分别为80．47 mg／g，59．94 mg／g；RSD分别为0．90%，2．10%。

2．5 加样回收率取已经测定含量的样品6份，约10 mg，精密称定，按样品中各成分的含有量精密加入混合对照品溶液（吉马酮0．400 mg／ml，呋喃二烯0．333 mg／ml）2 ml，制备供试品溶液，依法测定峰面积并计算回收率，吉马酮和呋喃二烯的平均回收率（n=6）分别为103．2%，102．2%，RSD分别为1．44%，1．28%。

2．6 样品含量测定取各批次莪术油，制备供试品溶液，依法进样测定，用外标法计算吉马酮和呋喃二烯的含量，结果见表2。

表 2 莪术油中吉马酮、呋喃二烯的含量测定结果（mg／g，n=2）

3 讨论

莪术为姜科植物蓬莪术 （Curcuma phaeocaulis Val）、广西莪术 （Curcuma Kwangsiensis S．G．Lee et C．F．Liang）或温莪术种子 （Curcuma wen yujinY．H．Chen et C．Ling）的干燥根茎［1］。具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化，调剂免疫，促进伤口愈合等作用，临床应用十分广泛［2-4］。挥发油中主要含有倍半萜类物质，被确定的有莪术醇、吉马酮、莪术二酮、莪术烯、莪术内酯等有效成分［5］。目前，吉马酮，呋喃二烯，莪术醇，莪术二酮等倍半萜类成分被认为是莪术油的主要药理活性成分，莪术油的含量测定多以吉马酮，莪术醇，莪术二酮，呋喃二烯为指标［6-9］。莪术油主要为单贴，倍半萜及其衍生物，其中不同成分如吉马酮，呋喃二烯，莪术二酮等具有较强的挥发性［7-9］，可以采气相色谱法（GC）进行测定，但由于呋喃二烯等为热敏性在高温下易转化为莪术烯［8］，GC法无法测定其真实含量。本实验参照相关文献［1-7］建立了HPLC梯度洗脱法，为同时测定黔产莪术和种子挥发油中吉马酮和呋喃二烯的含量提供了方法学参考。

根据2010版《药典》［1］中规定：三种莪术品种只要求了挥发油总量不少于1．5%，对挥发油的具体成分，仅注明了温莪术挥发油中吉马酮和呋喃二烯含量不少于7．5%和10．0%，其余品种没有要求。本实验研究所得结果，为黔产莪术及其种子中挥发油的进一步质量控制提供了实验数据。

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［M］．北京：中国医药科技出版社，2010：257-258，388．

［2］项秀娣，吕圭源，陈素红，等．莪术油质量控制及药理研究进展［J］．中国现代应用药学，2010，27（11）：979-982．

［3］吴海霞，孙志明，王 勤．莪术油的药理学研究及临床应用研究进展概况［J］．中国中医药导刊，2011，13（1）：79-83．

［4］曾建红，黄凤香，廖 迎．莪术油的含量测定和抗肿瘤作用的新进展［J］．肿瘤药学，2012，2（1）：19-22．

［5］展晓日，曾昭武，孟凡莉，等．莪术油药学研究进展［J］．杭州师范大学学报，2011，10（5）：454-458．

［6］王佳丽，王 秀，夏 泉，等．莪术油中3种倍半萜类化合物对肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的研究［J］．中成药，2014，36（7）：1535-1539．

［7］张 鹏，祝 明，唐登峰，等．HPLC同时测定莪术油中3种倍半萜类成分的含量［J］．药物分析杂志，2009，29（11）：1825-1827．

［8］姚慧娟，姚慧敏，卜书红，等．RP-HPLC法同时测定莪术油自乳化软胶囊中6种倍半帖成分的含量［J］．中国药房，2013，24（11）：1010-1012．

［9］牛 冲，张冬梅，刘明洁．复方莪术油栓中呋喃二烯及莪术醇的测定［J］．中国药品标准，2013，14（2）：131-133．

［2015-09-21收稿，2015-10-20修回］ ［本文编辑：李思睿］

Comparison on the components of extracted volatile oil from Guizhou curcuma zedoary and from their seeds

XV Zheng-xu①，ZHU Shi-guo，LUO Jun，et al．①Department ofPharmacologyofGuizhou Medical University，Guizhou，Guiyang 550025，China

Objective To study the methods of the quality control and the content ranges on Guizhou curcumazedoaryand seedsextracted volatileoil．Methods HPLC simultaneousdetectinggermacroneand furanodiene contents in Guizhou curcuma zedoary and its seeds was taken：The column was Diamonsil C18analytical column（4．6 mm×250 mm，5 mm）with gradient elution （60%A-95%A，20-35 min，0-20 min，95%A）of acetonitrile（A）-water（B）at the flow rate of 1 ml／min；Detection wave length was 216 nm，and the column temperature was maintained at 35℃，injected 10 μl．Results The detected concentration on germacrone and furandiene respectively were 4．18-83．6 μg／ml（r=0．9999），10．21-204．2 μg／ml（r=1．0000）which showed a good linear relationship；the average recoveries were（n=6）103．2%（RSD=1．44%），102．2%（RSD=1．28%），The experimental repeatability of RSD（n=6）were 0．90%，2．10%．Conclusion From Guizhou curcuma zedoary and its seeds extrated volatile oil quality can be controlled by controlling the germacrone and furanodiene contents．Controlling area on germacrone and furanodiene in Guizhou curcuma zedoary extrated oil respectively were 85．87%-100．10%，59．07% 78．92；Germacrone and furanodiene in its seeds extrated oil respectively were 65．69%-80．47%，59．94%-68．41%．

HPLC；Guizhou curcumazedoary；The seed ofGuizhou curcuma zedoary；Germacrone；Furanodiene

R944．1

A

10．14172/j．issn1671-4008．2016．03．025

贵州省厅校联合项目（黔科合LG字［2011］006号）；贵州省社会发展项目（黔科合SY（2008）3027号）。

550025贵州贵阳，贵州医科大学药理教研室（许政旭，朱诗国，罗俊）；563002贵州遵义，遵义医药高等专科学校（潘年松，刘英波）

罗俊，Email：724730885＠qq．com