儿童原发性肾病综合征肾组织中Toll样受体4及Toll样受体7的表达

陈国强，郝亚宁

(1.陕西省西安市儿童医院肾内科，陕西 西安 710003；2.西安交通大学第一附属医院肾内科，陕西 西安 710061)

儿童原发性肾病综合征肾组织中Toll样受体4及Toll样受体7的表达

陈国强1，郝亚宁2

(1.陕西省西安市儿童医院肾内科，陕西 西安 710003；2.西安交通大学第一附属医院肾内科，陕西 西安 710061)

目的 探究儿童原发性肾病综合征肾组织中Toll样受体4(TLR4)及TLR7的表达及临床意义。方法 选取陕西省西安市儿童医院自2013年7月至2016年7月收治的300例接受肾活检的儿童原发性肾病综合征肾组织作为观察组，按照病例分型可分为MCD型(78例)、MN型(72例)、MsPGN型(75例)及FSGS型(75例)，另选择同期收治的70例肾母细胞瘤患儿的正常肾组织作为对照组，采用免疫组化的方法对两组肾组织中TLR4及TLR7的表达水平进行检测。结果 观察组中的不同病理类型组与对照组相比肾小管组织中TLR4的表达水平较高，不同病理类型组织中MCD型肾小管组织中TLR4的表达水平要明显高于其他组，依次是MN型、MsPGN型及FSGS型，差异具有统计学意义(t=4.56～9.23，均P<0.05)。观察组中的不同病理类型组与对照组相比肾小管组织中TLR7的表达水平较高，不同病理类型组织中MsPGN型肾小管组织中TLR7的表达水平要明显高于其他组，依次是MN型、MCD型及FSGS型，差异均具有统计学意义(t=4.82～10.25，均P<0.05)。结论 TLR4及TLR7在儿童原发性肾病综合征肾组织中呈现较高的表达水平，且其表达水平在不同病理类型中有一定的差异。

儿童原发性肾病综合征；肾组织；Toll样受体4；Toll样受体7

Toll样受体(TLR)作为机体中一类重要的跨膜蛋白，属于天然的免疫分子，在机体中的主要作用为通过对不同病原微生物相关分子模式进行有效的识别，从而在免疫功能中发挥重要的作用[1]。近年来，有研究报道指出，Toll样受体还可对获得性免疫提供有效的刺激信号，从而引导一系列的炎症反应[2]。由于儿童原发性肾病综合征的发病机制与T淋巴细胞功能紊乱相关，在该病发生发展期间多伴随着各种细胞因子水平及功能的紊乱，而Toll样受体的信号通路此时则对感染性与非感染性肾脏疾病产生了介导作用[3]。但目前关于Toll样受体在儿童原发性肾病综合征中的表达水平的研究较少，现本研究对此展开分析，将结果报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取陕西省西安市儿童医院自2013年7月至2016年7月收治的300例原发性肾病综合征患儿肾活检的肾组织作为观察组，纳入及排除标准：均符合2009年中华医学会儿科学会肾脏组制定的标准[4]，在穿刺活检前1个月内未出现感染者；排除肾活检剩余组织较少者，排除合并其他严重心血管疾病者。按照肾病综合征诊治指南与激素耐药型肾病综合征诊断标准分型[5]，肾脏病理分型由本院专业人员完成，分为微小病变(MCD型)共78例；膜性肾病(MN型)共72例；系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN型)共75例；局灶性肾小球硬化(FSGS型)共75例。观察组根据病理分组进一步分为MCD组、MN组、MsPGN组、FSGS组，另选择同期收治的70例肾母细胞瘤患儿的正常肾组织作为对照组，5组一般资料比较差异均无统计学意义，具有可比性。5组患儿家属均签署了关于本次试验的知情权同意书，试验符合医学伦理会审核批准。

1.2方法

采用免疫组化的方法对观察组和对照组肾组织中TLR4及TLR7的表达水平进行检测，检测所用仪器和试剂盒由上海基因科技有限公司提供。对TLR4及TLR7表达水平采用数码显微图像分析系统进行观察分析。

1.3判断标准

将肾组织中褐色的染色区域作为判断阳性的区域。在每张组化切片中随机选取10个互相不重叠的肾小球横切片，计算出每个肾小球阳性面积与整个肾小球面积的比值，采用所计算出来的结果分别代表TLR4、TLR7的表达水平[6-7]。

1.4统计学方法

2结果

2.1一般资料对比

5组患儿的性别、年龄及病程比较差异均无统计学意义(F值分别为1.23、1.27、1.03，均P>0.05)，见表1。

表1 5组患儿一般资料对比

2.2肾组织中TLR4的表达水平对比

5组肾小球组织中TLR4的表达水平比较差异无统计学意义(F=0.92，P>0.05)。观察组中的不同病理类型组与对照组相比肾小管组织中TLR4的表达水平较高，MCD组肾小管组织中TLR4的表达水平要明显高于MN组、MsPGN组及FSGS组，差异均具有统计学意义(t=4.56～9.23，均P<0.05)，见表2。

表2 5组肾组织中TLR4的表达水平对比

2.3肾组织中TLR7的表达水平对比

5组肾小球组织中TLR4的表达水平比较差异无统计学意义(F=0.78，P>0.05)。观察组中的不同病理类型组与对照组相比肾小管组织中TLR7的表达水平较高，MsPGN组肾小管组织中TLR7的表达水平要明显高于MN组、MCD组及FSGS组，差异均具有统计学意义(t=4.82～10.25，均P<0.05)，见表3。

表3 5组肾组织中TLR7的表达水平对比

3讨论

3.1 Toll样受体在人体中的作用机制

TLR主要存在于人体的免疫细胞中，其主要功能是对病原体的分子模式进行有效的识别，对天然免疫反应进行妥善地调节，同时能够发挥介导炎症反应的作用，对病原微生物的侵袭发挥充分的抵御效果[8]。近年来，针对Toll样受体中比较具有代表性的TLR4及TLR7展开的研究发现，二者在人体中的表达水平与原发性及感染性肾脏疾病的发生发展有密切的相关性，同时其也可在免疫治疗中发挥较为突出的作用[9]。另外，有专家学者对Toll样受体的信号通路在原发性肾病综合征中的作用展开研究，一方面发现机体在发生感染及损伤的情况下时，可诱导产生Toll样受体的依赖性炎症，促进疾病的进展[10]。另一方面发现Toll样受体能够对机体局势细胞、NK细胞等一系列机体固有的免疫细胞产生明显的活化作用，对例如核转录因子(NF-KB)等下游信号分子产生激活的作用，与机体炎症反应的发生具有一定的关系，对炎症因子也可产生激活作用[11]。

3.2不同病理类型下肾组织中的TLR4及TLR7的表达水平及意义

在本次研究中，我们针对不同病理类型下肾组织中的TLR4及TLR7的表达水平进行对比观察，可见观察组中的不同病理类型组与对照组相比肾小管组织中TLR4的表达水平较高，不同病理类型组织中MCD型肾小管组织中TLR4的表达水平要明显高于其他组，依次是MN型、MsPGN型及FSGS型。观察组中的不同病理类型组与对照组相比肾小管组织中TLR7的表达水平较高，不同病理类型组织中MsPGN型肾小管组织中TLR7的表达水平要明显高于其他组，依次是MN型、MCD型及FSGS型。可见TLR4及TLR7在儿童原发性肾病综合征发病过程可能起到一定的作用，介导了IgA肾病免疫异常的情况，通过对TLR4及TLR7所识别的主要配体类型进行分析可见，儿童原发性肾病综合征的发生可能与细菌及病毒感染相关[12]。另外，有临床资料显示，TLR7可通过升高抗RNA抗体的生成，诱导系统性红斑狼疮的发生发展[13]。

综上所述，TLR4及TLR7在儿童原发性肾病综合征肾组织中呈现出较高的表达水平，且其表达水平在不同病理类型中具有一定的差异。但本次研究尚未对不同病理类型中TLR4及TLR7表达水平的规律进行探究，仍存在不足，可进一步研究以获得更精确的结论，为儿童原发性肾病综合征的诊断及治疗提供可靠的依据。

[1]Lim B J,Lee D,Hong S W,etal.Toll-like receptor 4 signaling is involved in IgA- stimulated mesangial cell activation [J].Yonsei Med J,2011,52(4):610-615.

[2]孙午,熊莺,王敏,等.黄芩苷对人淋巴细胞Toll样受体的调节[J].中国免疫学杂志,2012,28(8):706-711.

[3]Shimada M,Araya C,Rivard C,etal.Minimal change disease: a "two-hit" podocyte immune disorder?[J].Pediatr Nephrol,2011,26(4):645-649.

[4]张小立,冯修高.TLR4分子相关疾病及其临床上潜在的应用价值[J].中华临床医师杂志(电子版),2013,7(5):2192-2194.

[5]Shimada M,Ishimoto T,Lee P Y,etal.Toll-like receptor 3 ligands induce CD80 expression in human podocytes via an NF-kB dependent pathway[J].Nephrol Dial Transplant,2012,27(1):81-89.

[6]张芳敏,韩子明,赵德安.Toll样受体4和Toll样受体7在儿童原发性肾病综合征患儿肾组织中的表达及意义[J].临床儿科杂志,2014,32(6):512-513.

[7]李华强,郭春芳,谢黎明,等.TLR4、TLR7蛋白在宫颈鳞癌中的表达及其意义[J].局解手术学杂志,2015,24(5):502-503.

[8]潘晓芬,刘玉玲,李小琳,等.49例IgM沉积儿童原发性肾小球疾病的临床特征及预后[J].中国妇幼健康研究,2016,27(7):828-830.

[9]薛源,韩悦,张欣欣.Toll样受体在肝衰竭发病中的作用研究进展[J].实用肝脏病杂志,2014,17(6):665-668.

[10]Hasimu A,Ge L,Li Q Z,etal.Expressions of Toll-like receptors 3, 4, 7, and 9 in cervical lesions and their correlation with HPV16 infection in Uighur women[J].Chin J Cancer,2011,30(5):344-350.

[11]吴红艳,黄燕萍,廉国利,等.重组生长激素在肾病综合征患儿中的应用研究[J].中国妇幼健康研究,2012,23(4):450-453.

[12]郝胜,吴滢,康郁林,等.儿童原发性肾病综合征肾组织CD2AP表达与足细胞损伤相关性的初步探讨[J].中国循证儿科杂志,2015,10(1):71-74.

[13]史秀岩,张春,付应峰,等. CD2相关蛋白在肾病综合征中的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志,2012,28(5):490-494.

[专业责任编辑：孙 新]

Expression of toll like receptor 4 and 7 in renal tissue of children with primary nephrotic syndrome

CHEN Guo-qiang1, HAO Ya-ning2

(1.DepartmentofNephrology,Xi’anChildren’sHospital,ShaanxiXi’an710003,China; 2.DepartmentofNephrology,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710061,China)

Objective To probe and analyze the expressions of toll like receptor 4 (TLR4) and TLR7 in renal tissue of children with primary nephrotic syndrome and its clinical significance. Methods Renal tissues of 300 children with primary nephrotic syndrome hospitalized for renal biopsy in Xi’an Children’s Hospital from July 2013 to July 2016 were selected as observation group, and according to case classification divided into MCD type (78 cases), MN type (72 cases), MsPGN type (75 cases) and FSGS type (75 cases). Normal renal tissues of 70 children with nephroblastoma hospitalized at same period were chosen as control group. Immunohistochemical method was used to test the expression level of TLR4 and TLR7 in kidney tissues in two groups. Results Expression level of TLR4 in renal tubule tissue in different pathological type of observation group was higher than that in control group, and among different pathological types, expression level of TLR4 in renal tubule tissue in MCD type was significantly higher than that in other types, with MN type, MsPGN and FSGS type followed in sequence, and difference had statistical significance (tvalue ranged 4.56 to 9.23, allP<0.05). TLR7 expression level in renal tubule tissue in different pathological type of observation group was higher than that in control group, and among different pathological types, TLR7 expression level in renal tubule tissue in MsPGN type was significantly higher than that in other types, with MN type, MCD type and FSGS type followed in sequence, and difference was statistically significant (tvalue ranged 4.82 to 10.25, allP<0.05).Conclusion Expression levels of TLR4 and TLR7 are high in renal tissue of children with primary nephrotic syndrome, and its expression level has a certain difference in different pathological type

children with primary nephrotic syndrome; kidney tissues; toll like receptor 4 (TLR4); toll like receptor 7 (TLR7)

2017-01-20

陈国强(1975—)，男，副主任医师，主要从事肾病综合征方面的工作。

郝亚宁，副主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.08.004

R725.8

A

1673-5293(2017)08-0905-03