葡萄抗氧化作用的研究

仓木决，马梦婷，黄婉雨，李巧云

葡萄抗氧化作用的研究

仓木决1，马梦婷2，黄婉雨3，李巧云4※

目的：观察葡萄有无抗氧化作用。方法：采用体内抗氧化实验，以红景天为阳性对照，以蒸馏水为空白对照，将葡萄制汁以25%、50%、100%三种不同浓度给予小鼠灌胃20 d，测定小鼠红细胞中的超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量。体外抗氧化实验，直接用人血样本测不同浓度葡萄汁对红细胞中MDA的抑制率。结果：体内试验结果显示，红景天组有抗氧化作用，与空白对照组比较P＜0.05；而葡萄三个剂量组对SOD和MDA没有明显影响，与空白对照组比较P＞0.05，没有显著性差异。体外抗氧化实验结果显示，不同浓度的葡萄汁对MDA都有一定的抑制作用。结论：葡萄具有体外抗氧化作用；但体内抗氧化试验中葡萄对SOD和MDA并未见明显作用。

葡萄;抗氧化作用;超氧化物歧化酶;丙二醛

葡萄（Vitis vinifera），又称蒲桃、草龙珠、山葫芦、李桃、美国黑提，属于葡萄属葡萄科植物葡萄的果实，是世界最古老的植物之一。从中医的角度来说，葡萄味甘、酸，性平，无毒。有很高的营养价值，成熟的浆果中含有大量的葡萄糖，可被人体直接吸收；还有多种矿物质、维生素和氨基酸。现代的更多食品研究者将目光聚集在了葡萄中植物化学物的功效研究。植物化学物是植物的次级代谢产物，除个别维生素前体物外，均为非营养成分[1]，有研究者成功研究了葡萄籽的体外抗氧化功效，实验结果表明葡萄籽对自由基有较强清除作用[2]。也有以葡萄制品，如葡萄酒来进行体内抗氧化作用研究的，实验结果也表明食用了红葡萄酒的实验组大鼠的抗氧化酶活性和对照组有显著性差异，并有所提高[3]。本实验将通过观察红细胞中SOD和MDA的变化，探讨葡萄的体内和体外抗氧化功效。有助于对葡萄的营养价值和食疗作用进行进一步分析。

1 实验材料

1.1 原料与药品

葡萄，市售，500 g。用榨汁机榨汁过滤，即得原汁，浓度标记为100%，实验中作为高浓度，置冰箱低温储存。实验时用蒸馏水将原汁配稀释成50%（中浓度）、25%（低浓度）。

红景天混悬液，取生命红景天胶囊（四川艾丽碧丝制药有限公司，川卫食准字（2000）第069号，每粒胶囊含0.3g药物），配成药物浓度为0.06%的混悬液。

1.2 试剂

SOD试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20110407）；MDA测试盒（南京建成生物工程研究所，批号：20110329）

1.3 仪器

紫外-可见分光光度计（UV-730，日本日立株式会社）；自动平衡离心机（TD24A-WS，长沙湘仪离心机仪器有限公司）

1.4 动物、血样

人血样本，本校附院提供；

昆明小鼠，体重19～21g，雌雄各25只，由成都中医药大学动物中心提供。

2 试验方法

2.1 体内抗氧化实验

2.1.1 实验动物的准备 取小鼠50只，雌雄各半，随机分为五组：阳性对照组、空白对照组，高、中、低剂量实验组，每组10只，雌雄各5只。以每天0.2 mL﹒10g-1的剂量灌胃，实验组按高、中、低剂量分别给予浓度为100%、50%、25%的葡萄汁，阳性对照组的小鼠给予0.06%红景天混悬液，空白对照组的小鼠给予蒸馏水，连续给药20 d。最后一次给药后50 min，通过摘取眼球的方法取各组小鼠的内眦血约1mL，做肝素抗凝处理，测定SOD测试和MDA含量。

2.1.2 小鼠红细胞中SOD的测试 取小鼠肝素抗凝全血50 μL加入装有3 mL生理盐水的离心管中，以1500 r﹒min-1的速度离心3 min，除去上清液，得离心后沉淀。按照SOD试剂盒说明加入各试剂，测各管在550 nm吸光度值。

2.1.3 小鼠红细胞中MDA的测定 取小鼠肝素抗凝全血0.15 mL加入装有3 mL生理盐水的离心管中，按照MDA试剂盒说明加入各试剂。测各管532 nm吸光度值。

2.2 体外抗氧化实验

取新鲜人血样本5 mL（5%EDTA抗凝），将血样转移入离心管以4000 r﹒min-1的速度离心10 min，将血浆分离，得到红细胞，向其中加入等渗溶液至总体积80 mL，即得到红细胞悬浮液。用葡萄原液稀释配制成梯度浓度的葡萄待测液，浓度分别为5%、2.5%、1%、0.5%、0.25%、0.1%、0.05%。然后用洁净干燥试管，按不同浓度分别给每支试管中加入1 mL红细胞悬浮液，1 mL四氯化碳，1 mL葡萄待测液，作为实验测试管。再用洁净干燥试管加入1 mL红细胞悬液，1 mL四氯化碳和1 mL等渗磷酸钠缓冲液，作为阳性对照管。按照MDA试剂盒说明加入各试剂。测各管532 nm吸光度值。葡萄的抗氧化作用以MDA的抑制率（IR%）表示。

IR%=（OD阳性对照-OD实验测试组）*100%/OD阳性对照

3 实验结果

3.1 体内抗氧化实验结果

3.1.1 小鼠红细胞中SOD的测试结果 所有数据采用SPSS软件进行统计检验，得到以下结果：见表1。

表1 葡萄对小鼠红细胞内SOD的影响（n=10）X±SD

红景天组与空白对照组比较 *P＜0.05，葡萄组与对照组比较P＞0.05

结果说明：葡萄的三个剂量实验组与空白对照组所得数据相比，P＞0.05，未见到显著性差异。红景天组与空白对照组相比，P＜0.05，差异具有统计学意义。红景天组对小鼠SOD有抗氧化作用。

3.1.2 小鼠红细胞中MDA的测定结果 所有数据采用SPSS软件进行卡方检验，得到以下结果：见表2。

表2 葡萄对小鼠红细胞内MDA的影响（n=10）X±SD

红景天组与空白对照组比较 *P＜0.05，葡萄组与对照组比较P＞0.05

结果说明：葡萄的三个剂量实验组与空白对照组所得数据相比，P＞0.05，未见到显著性差异，红景组天与空白对照组相比，P＜0.05，差异具有统计学意义。红景天组对小鼠MDA有抑制作用。

3.2 体外抗氧化实验结果将各管的吸光度测出后，用“2.2”公式计算IR%后得到以下结果，见表3。

表3 葡萄体外抗氧化实验（n=10）

结果说明：体外实验中，葡萄能抑制红细胞中MDA的产生，具有体外抗氧化作用。且有一定量效关系。

4 讨论

本实验的局限性：食品不同于药物，本次实验的实施时间有限，只有20 d，给小鼠进行葡萄的灌胃，虽然能保证进食量，但食品的功效不一定在短期内就能够体现出来，可能需要较长时间才能表现出来。比如在郭金英等人做的红葡萄酒抗大鼠脂质过氧化作用的研究[3]中，就对大鼠进行了为期12 w的灌胃。其次就是实验过程中对葡萄的保存问题：本次试验是将葡萄制成原汁后进行冰箱低温保存，这个过程中可能存在葡萄汁中有效物质的丧失。

通过查阅文献可以看出葡萄的确充满了营养价值，特别是它的抗氧化功效，更是对人体健康保护具有积极作用。但葡萄的食用价值不仅仅如此，它对人体的健康促进作用也非局限于葡萄的抗氧化功效。因此，对葡萄的特殊功效研究和有效成分的开发还具有无限的潜力。希望通过本文，能够让更多的人了解葡萄，重视葡萄的食疗价值，从而通过食品来促进人类的健康。

[1] 孙长颢.营养与食品卫生学.北京：人民卫生出版社,2007，110.

[2] 许申鸿,杭瑚,郝晓丽.葡萄籽化学成分分析及其抗氧化性质的研究.食品工业科技.2000,21(2)：18.

[3] 李华.第四届国际葡萄与葡萄酒学术研讨会论文集.陕西：陕西人民出版社,2005,196.

Study on the antioxidant effect of grape/

CANGMU Jue, MA Meng-ting, HUANG Wan-yu, LI Qiao-yun//(1. First People 's Hospital of Tibet, Lhasa 85000, Tibet;2.Chengdu Center for Disease Control &Prevention, Chengdu 610041, Sichuan; 3. Science and Technology Department of Tibet, Lhasa 85000, Tibet;4.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, Sichuan)

Objective: To investigate the antioxidant effect of grape. Method: In vivo experiment, rhodiola was used as positive control and distilled water as blank control. Three different concentrations of grape juice (25%, 50%, 100% ) were fed to the mice for 20 days. The contents of superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde ( MDA) in mice erythrocyte were detected. In vitro experiment, the inhibitory rate of different concentrations of the grape juice on MDA in human blood were tested.Result: The result of in vivo experiments showed that rhodiola had antioxidant effect compared with the blank control (P＜0.05).There was no statistically signi fi cant difference of SOD and MDA between the blank control group and each of the three different concentrations of the grape juice ( P＞0.05). The result of in vitro experiment showed that different concentrations of the grape juice had an inhibitory effect on MDA. Conclusion: Grape has antioxidant effect in vitro, but no obvious effect on SOD and MDA in vivo antioxidation experiment in mice。

Grape; antioxidation; SOD；MDA

R 285

A

1674-926X(2017)04-010-02

1 西藏自治区第一人民医院 西藏，拉萨 850000；2 四川省疾控中心 四川，成都 610041；3 西藏科技厅 西藏，拉萨 850000；4 成都中医药大学 四川成都 610075

参木决，女，(1973-)，主管药师，从事药房处方调剂的研究Tel：0891-6371936 Email：109548977@qq.com

李巧云，女，教授 Email：xyqlqy@126.com

2016-03-24