非小细胞肺癌中MMP-9和MMP-13的表达及临床意义

叶丽新

目前, 肺癌已成为我国居民的重要死因, 其中肺癌患者中有80%左右属于非小细胞肺癌, 其中以肺腺癌最为多见［1］。细胞的迁移会首先降解细胞外基质, 而基质金属蛋白酶(MMPs)即是用以降解细胞外基质的一组蛋白酶, 其在肿瘤的生长、浸润和转移中的作用受到关注。MMP-9是MMPs家族中分子量最大的酶；MMP -13在MMPs 活化级联反应处于核心地位［2］。本研究检测了非小细胞肺癌组织中MMP-9、MMP-13的表达, 报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年5月～2017年5月本院收治的48例非小细胞肺癌患者, 纳入标准：①满18周岁；②术前未进行放化疗等治疗；③签署知情同意书。其中男32例,女16例, 年龄47～73岁, 平均年龄(55.71±7.69)岁；腺癌41例, 鳞癌7例；TNM分期：Ⅰ期13例, Ⅱ期30例, Ⅲ期5例；组织类型：低分化29例, 中分化10例, 高分化9例；淋巴结转移19例；肿瘤直径：≤5 cm 28例, ＞5 cm 20例。

1.2 方法 在患者手术中切取癌组织, 同时切除距肿瘤切缘5 cm的正常组织作为癌旁组织, 经甲醛固定、石蜡包埋,4 μm厚连续切片, 按试剂盒说明书行免疫组化染色, 鼠抗人MMP-9、MMP-13单克隆抗体均购自美国Biosource公司。依次完成脱蜡、修复、一抗孵育、二抗孵育、DAB显色等,用磷酸缓冲盐溶液(PBS)代替一抗作为阴性对照。结果判读：在200倍显微镜下选5个视野, 细胞浆出现棕黄色颗粒表示阳性, 计算每个视野中阳性细胞的比例, ＜25%计1分,26%～50%计2分, 51%～75%计3分, ＞75%计4分。将着色得分与阳性细胞比例得分相乘, 最后取5个视野的平均值,＞2分为阳性结果。

1.3 观察指标 比较癌组织与癌旁组织中MMP-9、MMP-13的表达阳性率, 分析肺癌组织中MMP-9、MMP-13的表达与临床病理特征的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验；等级资料采用秩和检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织与癌旁组织中MMP-9、MMP-13的表达 癌组织中MMP-9表达阳性32例(66.7%)、MMP-13表达阳性28例(58.3%)；癌旁组织中MMP-9表达阳性4例(8.3%)、MMP-13表达阳性有1例(2.1%)；癌组织中MMP-9、MMP-13表达阳性与癌旁组织比较, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 肺癌组织中MMP-9、MMP-13的表达与临床病理特征的关系 肺癌组织中MMP-9的阳性表达与分化程度、有无淋巴转移有关 (Z/H=1.954、2.196, P＜0.05)；MMP-13的阳性表达与分化程度、淋巴转移有关(Z/H=2.707、2.324,P＜0.05)；MMP-9、MMP-13的阳性表达均与性别、年龄、肿瘤直径无关(Z/H=0.487、0.174、1.651及0.513、0.603、0.661,P＞0.05)。

3 讨论

原发性肺癌是当前全球病死率最高的恶性肿瘤, 世界卫生组织(WHO)曾有报道, 每年多达110万的患者是死于肺癌［3］。由于大量吸烟及环境改变, 肺癌已成为人群中常见的恶性肿瘤, 尤其好发于50～80岁的人群, 且越来越多的年轻人也难逃肺癌的魔爪。早期确诊是肺癌的关键。

肿瘤的侵袭与转移是一个涉及基质降解、肿瘤血管形成等多个步骤的复杂过程。MMPs是降解细胞外基质的主要酶类, 一般分为分泌型MMPs与膜型MMPs, 既往研究表示, 分泌型MMPs表达越强, 其降解ECM与基底膜的能力越强, 肿瘤发生转移的危险越大［4］。MMP-9即属于分泌型MMPs, 能够降解Ⅳ型胶原, 而Ⅳ型胶原正是构成血管基底膜的重要成分；此外, 还能促进新生血管形成, 这无疑对肿瘤的侵袭与转移起到了推波助澜的作用［5］。本研究结果显示, 肺癌组织中MMP-9的阳性表达比例明显多于癌旁组织(P＜0.05)。既往研究表明, TNM分期越高、低分化以及伴随淋巴转移,MMP-9蛋白阳性表达越高, 提示MMP-9蛋白的表达对肿瘤的分化程度、侵袭与转移有影响。本结果显示, MMP-9的表达与肿瘤分化程度、有无淋巴转移有关(P＜0.05)。

MMP-13 具有很强的蛋白水解酶活性, 密切参与细胞外基质的重塑, 并可与 MMPs 家族中的其它成员相互作用参与肿瘤的发生与进展［6］。既往研究发现, MMP-13在头颈部癌、软骨肉瘤、肝癌、乳腺癌、胃肠道肿瘤等多种恶性肿瘤中都呈高表达［7］。研究表明［8］, MMP-13可能通过参与间质成分较强的降解过程, 以促进肿瘤的侵袭与转移；研究表明,MMP-13的表达与MMP-9成正相关, 提示MMP-13可能通过调节 MMP-9 的表达参与非小细胞肺癌的侵袭转移。研究表明, 非小细胞肺癌MMP-13 表达阳性的患者死亡率是阴性患者的4倍左右, 提示MMP-13 对非小细胞肺癌的预后有重要的预测价值［9］。本研究结果显示, 肺癌组织中MMP-13的阳性表达比例明显高于癌旁组织(P＜0.05)。同时, MMP-13的表达与肿瘤分化程度、有无淋巴转移有关(P＜0.05)。表明MMP-9与MMP-13在非小细胞肺癌组织中表达上调, 与肿瘤的分化、侵袭与转移密切相关, 而与肿瘤直径无关。但既往有研究表明, 肿瘤越大, 分泌MMPs的能力越强, 从而使MMPs 的级联反应激活, 增加肿瘤侵袭与转移的可能性［10］。

综上所述, MMP-9与MMP-13在非小细胞肺癌组织中表达上调, 与肿瘤的分化、侵袭与转移密切相关, 值得大样本进一步研究。