翻白草油对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响

李天柱，崔凤姬，王文涛，李宏，由丰铭，于淼，董雪琦，翟云鹏，王敏

（1．赤峰学院 医学院；2．赤峰生殖健康专科医院，内蒙古 赤峰 024000）

肝癌是恶性程度和复发率高、易转移的肿瘤之一[1].传统的外科手术、化疗或放疗等治疗手段都有局限性，生存率仍无改善.近年来，尽管在肝癌的诊断和治疗上有较大的进展，但对于肝癌细胞的增殖和侵袭机制仍未阐明，术后的复发转移是影响治疗效果的重要因素之一[2].因此，肝癌细胞增殖和侵袭转移的研究有重要的理论意义和应用价值.

翻白草是一种蔷薇科植物，在我国传统医药典籍和其他国家的民间都被广泛地应用.好多人对翻白草的化学成分、毒理和病理等生理等基础研究和对翻白草的药用、食用和生产化工原料等的应用研究付出了努力[3].

2011年，李忠秀等人分别研究发现翻白草油具有抑制人肝癌细胞HepG2的增殖，促进肝癌细胞凋亡的功能，可能是一种新型的抗肿瘤药物[4].但未见关于翻白草油对于肝癌细胞转移及侵袭能力的报道.通过本研究阐明翻白草油对肝癌细胞的转移及侵袭有影响，为肝癌的治疗方案寻求新的理论依据.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞：人肝癌细胞HepG2（中科院上海细胞库）.

1.1.2 实验试剂：DMEM细胞培养基和胎牛血清（Gibco公司）；TranswellTM 小室（Becton Dickinson Labware公司）.

1.2 方法

1.2.1 细胞培养：将HepG2细胞用含10%胎牛血清DMEM培养基，置于37℃、5%CO2、饱和湿度.

1.2.2 药物配制：用DMEM培养液将翻白草油（DMSO溶解）稀释成浓度10mg/mL储备液，4℃保存备用.

1.2.3 实验分组：翻白草油组（用DMSO稀释后，以DMEM培养液稀释成0.5mg/mL），另设对照组（仅加DMEM培养液）.

1.2.4 细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力：先把细胞重悬，各组细胞接种于24孔板，然后将细胞铺满后利用小枪头在24孔板中央画一条线，加入0.5mg/mL翻白草油，0h和48h观察并拍照，利用Image J测细胞迁移的距离，各取随机的5组计数.重复3次实验.

1.2.5 Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭能力：先把细胞重悬，上室加1×105细胞，然后在下室加DMEM完全培养液，48h后弃掉上下室的培养基，利用棉签擦拭上室的细胞.利用10%甲醛把细胞固定,用苏木精染色,用刀片将把小室膜切下，利用倒置显微镜分别计数5个视野穿模的细胞平均数.重复3次实验.

1.3 统计学分析

数据利用Sigma Plot 2000软件进行分析，数值采用均数±标准差（±s）表示，利用t检验检测显著性分析.

2 结果

2.1 翻白草油抑制人肝癌细胞HepG2的迁移能力

翻白草油组细胞划痕48h后迁移距离为（39±4.2）μm，对照组（221±6.8）μm.翻白草油组细胞迁移距离明显比对照组短(P＜0.05)（图1）.

图1 划痕实验48h后各组细胞的迁移情况(×100)

2.2 翻白草油抑制人肝癌细胞HepG2的侵袭能力

翻白草油组细胞侵袭48h后穿透小孔板的细胞数为（11±1）个，对照组（60±5）个.翻白草油组穿过小孔的细胞数明显比对照组少(P＜0.05)（图2）.

图2 Transwell侵袭实验各组细胞48h穿过小室的细胞数(×200)

3 讨论

肝癌是中国癌症患者死亡的原因之一，高度的血管浸润以及侵袭转移导致了预后不良的现象.目前,对抗肿癌药物研究从细胞毒型药物向癌症治病基因的拮抗剂的发展.因为中草药的毒副作用较小,所以从中药中寻找抗癌天然化合物引起了国内外诸多学者的高度重视.翻白草性味苦,平，功能主治祛风湿、解毒、痢疾和风湿筋骨疼痛等疾病[5].

研究表明翻白草油可抑制人肝癌细系HepG2的细胞增殖，促进肝癌细胞凋亡的功能[4].但目前，未见关于翻白草油对于肝癌细胞转移及侵袭能力的报道.肝癌患者的主要死亡原因是肝癌细胞的增殖和侵袭转移，也是导致治疗预后不良，易复发的原因.

通过本研究发现翻白草油能明显抑制HepG2细胞的迁移和侵袭.说明翻白草油对调控肝癌细胞的增殖和侵袭起着重要的作用.从而推测翻白草对肝癌细胞的转移及侵袭有影响，为肝癌的治疗提供新的理论依据.

〔1〕Hernandez-Gea V，Toffanin S，Friedman SL，et al．Role ofthe microenvironmentin the pathogenesis and treatment ofhepatocellular carcinoma[J]．Gastroenterology，2013，144：512-527．

〔2〕Zhang L，Yang J，Chen XQ，et al．Antidiabetic and antioxidant effects of extracts from Potentilla discolor Bunge on diabetic rats induced by high fat diet and streptozotocin [J]．J Ethnopharmacol，2010，132：518-524．

〔3〕Subbotina MD，Timchenko VN，Vorobyov MM，et al．Effect of oral administration of tormentil root extract (Potentilla tormentilla)on rotavirus diarrhea in children：arandomized,double blind,controlled trial[J]．Pediatr Infect Dis J．2003，22：706-711．

〔4〕李忠秀，王淑秋，刘蕾，等．翻白草油对肝癌HepG2细胞CDK4蛋白的影响[J]．黑龙江医药科学，2011（34）：25-26．

〔5〕Yoon WJ，Moon JY，Kang JY，et al．Neolitsea sericea essential oil attenuates LPS-induced inflammationinRAW 264．7macrophagesby suppressing NF-kappaB and MAPK activation[J]．Nat Prod Commun．2010,5(8)：1311-1316．