基于26S rRNA D1/D2区序列对不同时期大曲中酵母菌的分离与鉴定

窦晓，杨建刚，曹新志，马莹莹，郭家秀，张琦，苏畅

（四川理工学院生物工程学院，四川自贡 643000）

大曲作为中国白酒发酵过程中的发酵剂，可以给发酵过程提供微生物、前体风味物质以及各种酶类[1～3]。酵母菌作为大曲微生物中的主要组成部分之一，对大曲的功能的形成有着不可或缺的作用。传统的酵母菌株鉴定方法建立在菌株的形态、生理特性和生物化学特性质差异之上。然而这些特征会受培养条件的影响，在某种程度上具有不确定性，为确保鉴定结果的可靠性，鉴定一株菌经常需要完成 50～100项实验[4]。费时费力且重复性不高。

核糖体RNA基因(rRNA)存在于所有细胞生物中并具有相同的起源和功能，因而可以反映所有物种间具有可比性的进化史。而且rDNA中有些片段具有高度的序列同源性或保守性，从而可为不同物种间的系统学比较提供研究参考点。

Kurtzman & Robnett[5,6]和 Fell等[7]测定了所有已知酵母种类的26S rRNA D1 D2区序列，发现在这一600 bp左右的片段中，种内序列变异小于等于1%，而种间序列差异大于 1%。目前这一标准已被国际酵母分类学界普遍接受，从而也使酵母菌的菌种鉴定变得相对容易。近年来，以核酸为研究对象的分子生物学技术以其简便、准确等优点逐渐应用到酵母菌的分类鉴定中。

单链构象多态性(Single Strand Conformation Polymorphism，SSCP)技术是基因突变分析中最常用的方法之一。其理论基础是单链DNA具有序列特异性的二级或三级构象。一个或多个碱基的差异能影响其构象，在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，构象的改变表现为单链DNA迁移率的改变，根据各样品的单链迁移率，就可以把突变体和非突变体区分开。……