促红细胞生成素对高氧诱导人肺泡上皮细胞A549凋亡的预防作用及其机制

党嘉文，董文斌，雷小平，康兰，李清平，何娜

(西南医科大学附属医院，四川泸州 646000)

高氧肺损伤的确切机制至今仍未阐明。肺泡上皮细胞凋亡是高氧肺损伤的一个重要组织学特征[1,2]，细胞凋亡的发生与胞质内线粒体形态的动态变化存在密切联系[3]。而与线粒体形态变化相关的神经萎缩症蛋白 1(OPA1)是凋亡前期诱导因子[4]。近年大量研究[5～8]结果证实，促红细胞生成素 (EPO)是细胞因子超家族成员之一, 通过抗细胞凋亡、抗氧化应激、促血管生成、调节炎症等对抗多种组织损伤。但是EPO预处理是否可以预防高氧肺损伤目前尚未见报道。本研究用高体积分数氧处理人肺泡Ⅱ型细胞A549建立新生儿高氧肺损伤模型[9]，观察EPO预处理对高氧肺损伤的预防作用，并探讨其机制。现报告如下。

1　材料与方法

1.1细胞、仪器及试剂人肺泡上皮细胞A549由西南医科大学附属医院中心实验室提供；LX71型倒置相差显微镜购自Olympus公司；JEOI-1400透射电子显微镜购自JEOL公司；FORMA311型CO2培养箱购自Gibco公司；EPO购自成都地奥九泓制药厂；CCK-8购自日本同仁化学研究所；ANNEXIN V流式细胞凋亡检测试剂盒购自凯基生物公司；OPA1多克隆抗体(兔抗人)购自R&D公司；SP免疫组化试剂盒购自武汉博士德公司；线粒体膜电位检测试剂盒购自Biovision公司。

1.2 细胞分组及EPO应用方法 先将人肺泡上皮细胞A549复苏,加入含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养液,放入37℃、5%CO2培养箱中培养。待细胞生长至对数生长期时用0.25%的胰蛋白酶进行消化,传代培养。设观察1、2、3、4组及模型对照组、空白对照组。观察1、2、3、4组细胞分别加入10、20、50、100 IU/mL的EPO预处理24 h，然后置于氧浓度>90%的高氧培养箱内培养24 h。模……