金蛭方对缺血性中风大鼠血清及脑组织SOD活性和MDA含量的影响

1.河北省迁安市中医医院，河北 迁安 064400；2.河北省迁安市人民医院，河北 迁安 064400；3.河北中医学院，河北 石家庄 050000

缺血性中风约占中风病的30%，其发病率高、致残率高和死亡率高，给家庭及社会造成极大负担。氧化应激学是缺血性脑血管病的病理生理机制之一[1]。金蛭方系课题组经过10余年临床筛选出的治疗缺血性中风的效方，拟通过建立大鼠急性脑缺血再灌注模型，观察金蛭方对大鼠血清及脑组织中SOD活性及MDA含量的影响，以探讨其抗氧自由基水平方面的可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物 健康雄性SD大鼠60只，清洁级，体重250～300 g，由河北省实验动物中心提供，合格证号：1119069。

1.2 药物与试剂 金蛭方组成：水蛭、郁金、川芎、冰片(由迁安市中医医院制剂室制备)，上4味除冰片外水提浓缩成高、低剂量后加入相应研磨冰片，所含生药分别为：0.30 g/mL(高剂量)、0.15 g/mL(低剂量)。尼莫地平片(国药准字：H41022175，规格：20 mg/片，郑州瑞康制药有限公司)配制成0.001 g/mL水溶液。

水合氯醛注射液(批号：20120206，上海化学试剂公司)；超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(批号：20130704)、丙二醛(MDA)试剂盒(批号：20130709)均购自南京建成生物工程研究所。

1.3 仪器 MSE-25型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)，LAUDA-C3型循环恒温水浴箱(泰克仪器有限公司)，F6/10型超细匀浆机(上海弗鲁克流体机械制造有限公司)，AR1140型电子分析天平(Ohaus USA)，722型光栅分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。

1.4 造模方法 参考改良的Longa法[2]：颈部正中切口，用3-0手术丝线结扎颈外动脉(ECA)远端及枕动脉，在结扎线距分叉部2 mm处剪断ECA，将一端已加工成光滑球形的尼龙线从ECA残端插入进行结扎，将尼龙线经颈总动脉(CCA)分叉部插入颈内动脉(ICA)，此时松开CCA，ICA套线恢复血流，线栓推送顺滑，无出血。将线栓向上深入至分叉以上18～19 mm达到大脑中动脉开口处，将颈总动脉连同尼龙线一起结扎，缝合切口后外留尼龙线0.5 cm，放到单笼中，2 h后外拉尼龙线使其球端回至ECA进行缺血后再灌注。

1.5 分组与给药[3]60只大鼠自由进食饮水，饲养于18～22 ℃明暗各12 h的清洁级动物实验室内，喂养1周后，随机分为5组。①假手术组：手术时仅作颈部手术切口，钝性分离颈前肌，游离暴露颈总、颈外、颈内动脉，术后当日灌服蒸馏水。②模型对照组(简称模型组)：造模当日灌服蒸馏水。③金蛭方低剂量组(简称低剂量组)：造模当日灌服金蛭方，每日用药剂量为1.5 g/kg(相当于成人剂量的10倍)。④金蛭方高剂量组(简称高剂量组)：术后当日灌服金蛭方，每日用药剂量为3.0 g/kg(相当于成人剂量的20倍)。⑤性药尼莫地平片对照组(简称对照组)：术后当日灌服尼莫地平片，每日用药剂量为0.01 g/kg(相当于成人剂量的20倍)。各组1次/d灌胃，每次用药体积均按1 mL/100g计算，连续给药2周。

1.6 检测方法 实验2周末，于最后一次给药禁食12 h后，戊巴比妥钠45 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血5 mL，注入离心管中待凝固后，4 ℃，3000 r/min离心，10 min，分离血清，-20 ℃保存备用。取血后，迅速断头冰浴中取右侧大脑额叶皮层同一位置取脑组织100 g，滤纸吸干血迹，尽快加入预冷的生理盐水碾磨，制成组织匀浆，4 ℃3000 r/min离心，15 min，取上清液，-20 ℃保存备用。放免法检测血清及脑组织中SOD活性和MDA的含量，具体操作严格遵照试剂盒说明书。

2 结 果

模型组大鼠血清、脑组织中SOD活性较假手术组明显降低(P<0.01)；MDA含量均较假手术组明显升高(P<0.01)。用药后各治疗组大鼠血清和脑组织中SOD活性明显升高(P<0.05，P<0.01)；MDA含量明显降低(P<0.05，P<0.01)。高、低剂量组在增强SOD活性和降低MDA含量方面的作用优于对照组(P<0.05)。详见表1。

组别鼠数 血清 脑组织匀浆 SOD/U/mLMDA/nmol/mLSOD/NU/ngprotMDA/nmol/mgprot假手术组12281.33±10.24**3.88±0.57**88.61±6.66**166.38±16.19**模型组11187.12±9.888.16±0.9937.89±3.91240.71±15.86高剂量组10264.84±9.65**▲3.92±0.64**▲79.19±5.49**▲172.52±16.05**▲

组别鼠数 血清 脑组织匀浆 SOD/U/mLMDA/nmol/mLSOD/NU/ngprotMDA/nmol/mgprot低剂量组11258.67±9.47**▲4.10±0.78**▲70.12±4.88**▲185.63±15.94**▲对照组12237.14±8.14*4.55±0.84**55.61±4.67*200.38±15.67*

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；与对照组比较，▲P<0.05。

3 讨论

中风病临床症候学研究认为，缺血性中风患者多是在气血内虚的基础上，加之劳倦内伤、忧思恼怒、嗜食厚味、烟酒等诱因，导致气血逆乱，直冲犯脑，致气血瘀滞，脑脉痹阻。气滞、血瘀、络阻为本病的主要病机，“气行则血行”，行气、活血、通络为其有效治则。院内制剂“金蛭胶囊”(制剂号：冀药制字Z20051013)治疗缺血性中风10余年，疗效满意。方中水蛭破血逐瘀、通经活络，《本草汇言》曰：“水蛭逐恶血、散瘀血之要药也”；郁金行气活血，化痰降火，《本草汇言》曰：郁金其性清扬，能散郁滞，顺逆气，上达高巅，善行下焦；川芎行气活血，历代医家认为其善治中风病，称为治风圣药[4]；冰片醒神通窍，《本草衍义》：“芳香走窜，引药上行，独行则势弱，佐使则有功”，四药合用，共奏活血、化瘀、通络之功。

氧自由基损伤是缺血性卒中发生发展最重要且肯定的因素之一[5]。正常机体内自由基水平保持相对稳定，当脑缺血缺氧时，体内自由基产生、清除的平衡状态遭到破坏，使得自由基迅速大量产生，细胞膜的胆固醇含量耗竭，从而破坏神经细胞膜的完整性，最终导致细胞坏死、脑水肿及其他并发症[6]。SOD为主要的抗氧化酶之一，通过催化超氧阴离子自由基发生歧化反应阻断自由基毒性反应[7]，清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损伤。MDA是脂质过氧化的代谢终产物，存在于细胞膜的不饱和脂肪酸受到自由基的作用而产生的过氧化脂质中[8]。MDA的含量间接反映出机体细胞氧自由基的受损程度[9]。

研究表明，采用线栓法复制的缺血性中风大鼠模型脑组织中SOD活性明显降低，MDA含量明显增加。用药干预后，各治疗组大鼠血清、脑组织中SOD的活性降低及 MDA的含量升高，说明金蛭方减少自由基的产生，减轻脂质过氧化反应，起到脑保护作用。在此基础上，将对金蛭方对脑缺血再灌注损伤大鼠在抗氧自由基水平方面进行深入系统地研究。

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