胃癌高表达转录本1对胃癌细胞株AGS增殖、周期的影响及其机制

万颖，严芝强，韦四喜，夏英，刘娟娟，周春欢，黄海,

(1贵州医科大学，贵阳 550004；2贵州医科大学附属医院；3贵阳中医学院第一附属医院)

胃癌是好发于胃窦部胃黏膜腺上皮细胞的恶性肿瘤，其发生发展是一个复杂过程，涉及抑癌基因、致癌基因、细胞周期调控和蛋白异常编码、表达等多种表观遗传的改变[1～3]。据全球癌症统计数据显示，胃癌发病率排名第4，亚洲约占世界患病总数的六成[4]，中国每年约有30万人死于胃癌。由于缺乏早期特异性的检测方法和指标，许多患者就诊时已处于胃癌晚期，5年生存率低[5，6]。长链非编码RNA(LncRNA)是一类内源性RNA，通常由RNA聚合酶Ⅱ转录而成，以RNA的形式发挥作用，缺乏开放阅读框，可通过表观遗传、转录和转录后水平调节蛋白表达[7]。LncRNA在调控细胞增殖分化、肿瘤发生发展、疾病诊断及预后判断等各方面都起着重要作用[8～10]。胃癌高表达转录本1(GHET1)全长1 913 nt，是一种LncRNA，定位于人类基因组染色体7q36.1，在胃癌组织和细胞中都异常增高[11]。本研究观察了GHET1对胃癌细胞株AGS增殖、周期的影响，并探讨其机制。

1　材料与方法

1.1主要仪器及试剂实时荧光定量PCR仪，流式细胞仪，蛋白分析系统。LipofectamineTMRNAiMAX，Opti-MEM低血清培养基，逆转录试剂盒，SYBR®Premix Ex TaqTMⅡ，Cell Counting Kit-8，细胞周期试剂盒，BCA蛋白浓度测定试剂盒，周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、CDK6、CDK2及细胞周期蛋白E(Cyclin E)、Cyclin D兔源单克隆抗体，β-actin兔源多克隆抗体，ECL化学发光试剂盒。

1.2GHET1干扰序列si-GHET1转染及细胞GHET1检测取对数生长期AGS细胞，用含10%胎牛血清和1%谷氨酰胺的RPMI1640无双抗完全培养基吹打重悬，以每孔2×105个接种于6孔板中，置于5%CO2、37 ℃环境的温箱中培养，待细胞融合度约60%时进行分组。……