新型奶牛挤奶后药浴液质量标准的制定及临床效果评价

黄文华，李永钢，冯康康，张长磊，段启超，侯振明

(河南九鼎农牧发展有限公司)

乳房炎或隐性乳房炎是奶牛业最为头疼的疾病，病因很多，如挤奶损伤、环境污染、致病微生物感染等，而挤奶损伤和环境污染可以通过管理来减少或避免，唯有致病微生物感染难以控制，并且危害最大，因此，如何成功阻止致病微生物的感染，成为防治奶牛乳房炎或隐性乳房炎亟待解决的问题。目前，比较流行且确实有效的方法就是乳头药浴，而市场上奶牛乳头药浴的产品五花八门，选择一款合适的产品显得尤为重要，既要消毒效果理想，又要保证对乳头无刺激性，最重要的是在奶牛挤完奶后的半0内，甚至更短时间内阻止致病微生物的侵入。基于以上要求，本研究开发出一种新型乳头药浴涂膜剂，即奶牛挤奶后使用，既能对乳头杀菌消毒，又能在10分钟以内生成一层透气且自身难以脱落的保护膜，极佳的阻止了因奶牛卧倒而使致病微生物侵入乳头导管，引起乳房炎的发生。另外，添加润肤剂和防冻剂，既可以很好地保护乳头因大风吹刮造成的皲裂，又不会因为冬日北方过低的气温引起的结冰现象。本文就此产品，阐明其质量标准，并对其临床使用效果进行科学研究，以便为广大养殖朋友更好地使用和推广该药浴剂提供临床参考依据。

1 试验材料

试验原料：新型药浴液由河南九鼎农牧发展有限公司提供；同规格普通聚维酮碘溶液由市场某GMP制药公司提供。

仪器、试剂：滴定仪、稳定性试验箱、冰箱、细菌培养箱、培养皿、淀粉指示液、硫代硫酸钠滴定液、营养琼脂、营养肉汤等均由河南九鼎农牧发展有限公司提供。

菌种菌液：菌液1：取自同一健康奶牛药浴前后的左右乳房，并进行传代培养所得；菌液2：取自同一患乳房炎奶牛药浴前后的左右乳房，并进行传代培养所得。

试验动物：10头奶牛，由三门峡田丰养殖有限公司提供。

2 试验方法及结果

2.1 质量标准

2.1.1 性状 本品为红棕色粘稠液体。

2.1.2 刺激性 将本品原液涂抹于奶牛乳头上，奶牛不产生转圈、脚踢乳房、回头观望现象，且药浴后乳头无红、肿症状出现。

2.1.3 成膜性 将本品原液涂抹于奶牛乳头上，10分钟内生成一层用手可以撕下的保护膜。

2.1.4 防冻效果 将本品置于0℃～-10℃环境中，保持较好的流动性；置于-10℃～-20℃环境内不结冰成固体，保持一定流动性。

2.1.5 稳定性 将本品置于30℃稳定性试验箱内1个月，各项指标符合2015年版兽药典一部标准要求。

2.1.6 鉴别和含量 符合2015年版兽药典一部标准要求。

2.2 试验设计

2.2.1 消毒抑菌试验 试验分为6组：第1组，空白对照，不涂菌液，不消毒；第2组，阴性对照，涂菌液，不消毒；第3组，涂菌液，普通药浴液消毒0 h；第4组，涂菌液，普通药浴液消毒1 h；第5组，涂菌液，新型药浴液消毒0 h；第6组，涂菌液，新型药浴液消毒1 h。

2.2.1.1 菌液的制备

取菌种1，无菌条件下，用营养琼脂培养出斜面，然后取单菌落接种于营养肉汤中，经过37℃培养8h，备用。

2.2.1.2 药敏片的简易制备

用打孔机将制作直径为6毫米左右的圆形滤纸，按100张一份，制作5份，将制作好的滤纸分装到小西林瓶里，用牛皮纸封瓶口进行高压(121℃，20 min),烘干，然后每组加入10 mL供试品溶液，浸润彻底，备用。

2.2.1.3 操作方法

将菌液接种于固体营养琼脂培养基上。然后按照试验设计分组，将不同组的消毒液涂抹于培养基表面，1分钟后，将培养基置于37℃细菌培养箱内，培养10-12 h，观察每组培养基表面细菌的生长情况，并拍照记录。

2.2.1.4 抑菌结果对比

新型药浴液和普通聚维酮碘溶液作为药浴液消毒抑菌试验结果见图1。

图1 新型药浴液与普通聚维酮碘溶液消毒抑菌结果

从图1中不难发现，新型药浴液消毒抑菌效果明显高于普通聚维酮碘溶液，即便是稀释后的新型药浴液抑菌圈都要大于普通聚维酮碘溶液原液，究其原因不难理解，新型药浴液具有成膜性，能够在培养基表面形成一层厚膜，阻止了细菌的生长。

2.2.2 定量杀菌试验 试验分为4组：第1组，空白对照，无菌纯化水；第2组，阴性对照，纯菌液2；第3组，加菌液2，加普通药浴液；第4组，加菌液2，加新型药浴液。

具体操作如下：将无菌培养皿分别进行标记分组，然后每组加入相应的液体，菌液2(按照菌种1同样的方法处理)每组添加1 mL，药浴液每组添加10 mL，置于25℃环境中杀菌消毒1分钟，取出接种于固体营养琼脂平板培养基上，37℃培养16-18 h，记录菌落数，计算杀菌率，平行重复3次，要求杀菌率不低于99.9%，并比较两种药浴液的杀菌效果(见表1)。

表1 新型药浴液和普通聚维酮溶液杀菌效果对比

注：“--”表示不考虑

表1结果表明，新型药浴液和普通聚维酮碘溶液作为药浴液都能够杀死致病菌，杀菌率都要高于99%，且两者对比，新型药浴液平均杀菌率为99.98%，明显高于普通聚维酮碘溶液的99.53%，说明新型药浴液临床效果好于普通聚维酮碘溶液。

2.2.3 乳汁体细胞检测 于药浴前第7天、第2天、药浴后第1天、第6天、第12天和第18天分别采集5奶头每个乳区的乳汁作为样品，并标号记录，存于冷柜。挤奶前仅用清水洗净，消毒毛巾擦干，挤奶时要求每个乳区前2把奶弃掉，从第三把奶开始，将奶样直接放入灭菌过的专用样品瓶中，样奶收集好后送至检测中心进行乳汁体细胞的检测。具体结果见表2。

表2 药浴前后不同时间内5头奶牛不同乳区乳汁平均体细胞数

由表 2 可见，药浴前7天至药浴后18天试验奶牛乳样中体细胞的变化差异显著 (P<0.05)，乳汁中体细胞数由药浴前的55万左右/mL降低到了20万左右/mL，降低了约64%，充分说明新型药浴液能够有效降低乳汁中的体细胞数，间接反映出新型药浴液对预防奶牛乳房炎或隐性乳房炎作用突出。

3 讨论

研究证明，致使奶牛乳房炎、隐性乳房炎及奶质的优劣关键在于：乳头洁净程度。奶牛乳头处于暴露的环境中，乳头导管开放至闭合期间，时间虽然短暂，但仍极易受到致病微生物的侵袭，基于消毒液基础上的奶牛药浴液就显得尤为关键，挤奶前的消毒及挤奶后的防护，是阻止致病微生物侵入的有效措施。本研究开发的挤奶后药浴液，经过系列试验验证，能够在挤奶后10分钟内形成肉眼可见的透气膜，阻止致病微生物的侵入，并且含有甘油、植物精油等系列皮肤保水成分，避免乳房皮肤的干裂，还能够加速机械损伤的治愈，无刺激性，是一款适合当前牧场管理使用预防奶牛乳房炎，提高奶品质的环保产品。

参考文献:

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