抗真菌植物乳杆菌的筛选及其抗菌因素的研究

（内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室，呼和浩特010018）

0 前言

12株植物乳杆菌为研究对象，采用双层平板法对12株植物乳杆菌抗真菌特性进行了初步评价，并对其无菌上清液在不同温度和蛋白酶处理条件下的抑菌效果进行了分析。

1 材料及方法

1.1 菌株及来源

实验中所用的12株植物乳杆菌保藏于内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室乳酸菌菌种保藏库(LABCC)，菌株及来源见表1。实验中采用的6株用于植物乳杆菌抑菌试验检测的指示真菌的名称及来源见表2。

1.2 实验所用培养基及试剂

1.2.1 培养基

乳酸菌活化及筛选培养基：MRS broth（OXOID，CM 0359）；MRSagar（OXOID，CM 0361）。

指示真菌培养基：Potato Dextrose Agar(PDA,Oxoid,CM 0139)。

1.2.2 试剂

PBS溶液，2 mol/L NaOH；胃蛋白酶，胰蛋白酶，蛋白酶K购于大连宝生物工程有限公司。

表1 实验所用菌株及来源

表2 指示真菌

1.3 仪器与设备

冷冻离心机（5810R型，德国Eppendorf公司），台式高速离心机（TGL-16B型，德国Eppendorf公司），全自动高压蒸汽灭菌器（HA-300M，日本Hirayama公司），恒温水浴锅（HWS28型，上海一恒科技有限公司），电热恒温培养箱（DHP-9272型，上海一恒科技有限公司）BCD-245D型冰箱（青岛海尔股份有限公司），12001型电子天平（上海天平仪器厂），HPS-250型生化培养箱（哈尔滨市东明医疗仪器厂制造）；雷磁PHS-3C pH计（上海精密科学仪器有限公司），SW-CJ-2FD洁净工作台（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司）。

1.4 实验方法

1.4.1 抑真菌植物乳杆菌的筛选

采用双层平板法[8]（di-layer medium method）对菌株进行筛选，固体MRS作为下层培养基，待其凝固后，滴入3μL处于对数生长期的植物乳杆菌发酵液，于37℃培养24 h，每株菌做3个平行。真菌发酵液（106CFU/mL，OD 600=0.5）与半固体PDA培养基（琼脂0.75%）混合后，作为上层培养基。……