李小莉
(中日友好医院口腔科,北京 100029)
牙周病主要是以牙周组织的损坏为特征的常见病,而人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)是牙周组织的主要细胞。增加hPDLF的增殖能够促进牙周组织的再生,从而增加压根与牙槽骨的连接,研究发现微小RNA(microRNA,miRNA)与hPDLF的增殖有着密切的关系,马静雯等[1]发现miRNA-145可能通过下调ROCK1的表达抑制hPDLF的迁移。miRNA是一种单链核苷酸,能够与特定基因mRNA的3’-UTR结合,从而调控细胞的生理功能。Mak CS[2]发现miR-141/KLF12可增强无神经耐药性。但是miRNA-141在hPDLF中的作用还不清楚。本文主要通过Western blot等技术研究miRNA-141对hPDLF增殖的影响。
选择临床9~30岁健康人和牙周炎患者恒牙。取牙膜组织并分离成小块,于37℃、5% CO2培养箱中培养。
使用TRIzol法提取总RNA,并使用试剂盒进行qRT-PCR检测。
收集细胞,裂解、变性,并电泳、转膜,与不同抗体孵育过夜后,孵育二抗1 h后,置于成像系统中拍照。
本课题首先使用qRT-PCR检测miRNA-141的表达,如图A所示,牙周炎患者的hPDLF中miRNA-141显著高于健康组,且差异有显著意义,差异有统计学意义(P<0.05)。如图B所示, miRNA-141 inhibitor能够显著下调miRNA-141的表达。如图C所示,hPDLF中癌基因Cyclin D1、C-myc表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。
hPDLF是牙周膜组织中的主要效应细胞,能够通过自身的增殖降低牙周组织的坏死,还可以分化成成骨细胞。因此,如何增加hPDLF的增殖是治疗和改善牙周病的关键。本研究发现,miRNA-141在牙周炎hPDLF中高表达。使用miRNA-141 inhibitor抑制miRNA-141表达后能够显著增加细胞增殖相关蛋白CyclinD1和C-myc的表达。周茜雯等[4]研究发现,箭根酮能够明显抑制LPS刺激的hPDLF增殖。综上所述,本研究发现抑制miRNA-141表达可以增加hPDLF的增殖,从而改善牙周病组织微环境。这说明miR-141可以作为治疗的靶点之一。
miRNA-141对hPDLF增殖的影响