64例Ⅳ期贲门癌组织中KRAS突变与血清CA19-9水平的相关性研究

牛 虹，王留兴，田同德

(1.郑州大学附属肿瘤医院中西医结合肿瘤内科，河南 郑州 450008；2.郑州大学第一附属医院肿瘤科，河南 郑州 450052)

中国胃癌发病人数和死亡人数分别占全球胃癌发病和死亡的42.6%和 45.0%，在全球183个国家中发病率居第5位、死亡率居第6位[1]。肺癌发病居全国恶性肿瘤发病的首位，每年发病约78.1万，其后依次为胃癌、结直肠癌、肝癌和乳腺癌[2]。按死亡人数顺位，肺癌居全国恶性肿瘤死亡首位，死亡病例约62.6万，其后依次为肝癌、胃癌、食管癌和结直肠癌。

RAS基因家族隶属于一个常见的癌基因家族，可以激活包括经典丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)通路在内的多条信号途径，分为HRAS、KRAS、NRAS等3个亚型，其中KRAS及下游BRAF在绝大多数的胃癌中发生突变[3]。

糖类抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)是一种粘蛋白型的糖类蛋白肿瘤标志物，为细胞膜上的糖脂质，在血清中以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎儿胰腺、胆囊、肝、肠和正常成年人胰腺、胆管上皮等处。1979年Koprowski等[4]用结肠癌细胞系WS1116免疫小鼠，并与骨髓瘤杂交得到NS1116(CA19-9) 单克隆抗体。

我们观察到Ⅳ期贲门癌组织中KRAS突变和血清CA19-9的升高具有一致性，因此，本文就贲门癌中KRAS突变和血清CA19-9升高之间的相关性进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集郑州大学附属肿瘤医院2015年1月至2018年12月经胃镜病理确诊的Ⅳ期贲门癌患者64例，其中男35例，女29例，患者年龄41～80(62.0±6.7)岁。

1.2 KRAS和CA19-9检测方法用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测胃镜取得癌组织中的KRAS突变情况。晨起空腹采集静脉血3 mL，用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测患者血清中CA19-9水平，其中≤100 u·mL-1为阴性，>100 u·mL-1为阳性。

1.3 统计学处理采用SPSS 23.0进行统计学分析，KRAS和CA19-9表达的相关性分析用Spearman相关分析，检验水准α=0.05。

2 结果

64例Ⅳ期贲门癌组织中KRAS突变阳性者27例(42.19%)，血清中CA19-9阳性者25例(39.06%)。27例KRAS突变阳性者中23例CA19-9阳性，两者均阳性者占35.94%；37例KRAS突变阴性者中35例CA19-9阴性，两者均阴性者占54.69%。64例贲门癌中KRAS和CA19-9表达呈正相关(rs=0.808，P<0.001)。见表1。

表1 64例Ⅳ期贲门癌组织中KRAS与血清CA19-9表达的相关性

注：rs=0.808，P<0.001

3 讨论

贲门癌有着与胃癌不同的生物学特性。王霞等[5]发现胃癌的贲门部位人表皮生长因子受体2(HER-2)阳性率高于其他部位，且肠型胃癌患者的HER-2表达明显高于混合型及弥漫型，表明HER-2高表达与胃癌病变部位有关。Yu等[6]研究发现，HER-2过表达与患者的年龄>60岁、肿瘤位于贲门、腺瘤和高中分化组织学分型相关。

本文研究了贲门癌组织中KRAS的表达情况，与HER-2基因表达类似，贲门部癌变常伴随KRAS基因的突变。KRAS是表皮生长因子受体(EGFR)下游信号传导通路中的关键环节，突变后的KRAS基因不依赖于上游EGFR的活化而直接激活MAPK信号通路，导致肿瘤增殖、转移等[7]。KRAS是最易被激活的致癌基因之一，其中17%～25%的肿瘤具有激活的KRAS突变[8]。致癌的KRAS基因的激活关键区域主要为密码子12、13、59、61和63[9-10]。这些激活的突变通过失活内源性鸟苷三磷酸(GTP)酶活性并引起GTP酶活化蛋白抵抗，从而增加GTP结合态的RAS蛋白含量[11]。

在内胚层来源的胰腺癌(85%)、肺癌(35%)和结肠直肠癌(30%)中，KRAS突变频率最高。这些组织由一系列不同分化的细胞类型组成，这些细胞具有专门的功能，但有共同的祖细胞，均来自相同的原始胚层内胚层。这一特性提示，突变活化的KRAS可能在内胚层祖细胞或干细胞水平上发挥致癌活性[12]。活化的KRAS在产生内胚层来源组织的祖细胞或干细胞中可发挥独特的活性,在这些组织中,KRAS的突变率较高,这一特性提示,突变活化的KRAS可能在内胚层祖细胞或干细胞水平上发挥致癌活性[13]。

而胃癌也发生于内胚层。本研究中64例Ⅳ期贲门癌中KRAS基因突变者27例，阳性率为42.19%。略高于Lee等[14]报道的37.5%，这可能与本研究均为Ⅳ期患者有关。Lee等[14]检测了140例胃癌的KRAS基因突变特征，发现其中11例(7.9%)的密码子12产生了突变，发生在不同位置的肿瘤，其KRAS突变率亦有区别，位于胃上1/3的肿瘤的KRAS密码子12突变频率更高(37.5%)，胃中1/3的突变率为13.8%，胃下1/3的突变率为3%。Kim等[15]在66例胃癌和16种胃癌细胞系中发现了7种KRAS错义突变，没有发现BRAF突变。而谢玲等[16]报道96例胃癌中，漫型胃癌KRAS基因突变率(9.1%)高于肠型胃癌(2.7%)，但差异无统计学意义(P>0.05)，而弥漫型胃癌预后相对较差，提示KRAS突变者预后不良。

CA19-9属于一种低聚糖类抗原，是一种含黏液成分的大分子糖蛋白，结构为唾液酸化的Ⅰ型乳糖系岩藻五糖，包括6个糖基，相对分子质量为5×106[17]。Lamerz等[18]统计分析发现，CA19-9在胰腺癌患者中升高最明显,敏感性最高,胆管癌次之,胃癌、结肠癌、卵巢癌再次之,部分肺癌、乳腺癌、子宫癌也可升高；CA19-9升高还可见于胰腺癌以外的恶性肿瘤。在多种腺癌，特别是进展期胃癌中，CA19-9水平也可能升高[19-20]。

本研究结果显示，64例Ⅳ期贲门癌组织中KRAS突变阳性者27例(42.19%)，血清中CA19-9阳性者25例(39.06%)。27例KRAS突变阳性者中23例CA19-9阳性，两者均阳性者占35.94%；37例KRAS突变阴性者中35例CA19-9阴性，两者均阴性者占54.69%。64例贲门癌中KRAS和CA19-9表达呈正相关(rs=0.808，P<0.05)。在胰腺癌研究中也发现了KRAS和CA19-9呈正相关[21]。研究[22]发现，血清CA19-9水平升高大肠癌患者的KRAS和BRAF基因的突变率更高。

CA19-9是Lewis血型抗原的组成部分，其产生或合成与Lewis血型密切相关。在少量Lewis血型均阴性人群中，CA19-9会呈现假阴性。本研究中27例KRAS突变患者中有2例患者CA19-9阴性，推测这2例患者有Lewis血型均阴性可能。

CA19-9升高和KRAS突变均预示临床预后不佳，贲门癌血清中CA19-9的表达与癌组织中KRAS突变具有一致性，但CA19-9的检测相对简单、经济，利于在基层医院开展，可帮助判断预后。我们分析贲门癌KRAS突变过程中可能同时伴随某种酶的活化导致CA19-9升高，但具体机制尚需进一步深入研究。