甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR）基因多态性与GDM关系

于天龙

妊娠期糖尿病（gestational diabete mellitus，GDM）可使产妇妊娠期高血压疾病、胎膜早破等的几率增加，且围生期巨大儿，胎儿窘迫等的发生明显高于正常孕妇[1]。GDM的发生与多种因素有关，包括一般因素（孕妇超重或肥胖、体重增长过快、高龄、血清血脂水平等）[2-4]、遗传因素、炎症因子、脂肪因子（瘦素、脂联素等）[5-7]。但是，GDM的发病机制尚未完全明确。本文拟研究MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）基因多态性与GDM易感性的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月—2018年6月来我院就诊的孕妇60例作为研究对象，将孕妇分为GDM组（27例）和血糖正常组（33例）。根据国际妊娠糖尿病研究协会（IADPSG）推荐的GDM诊断标准为75 g OGGT：空腹血糖 ≥ 5.1 mmol/L；1小时≥10.0 mmol/L；2小时≥8.5 mmol/L。

1.2 血糖和血清HCY检测

采集空腹静脉血5 mL于BD真空生化管中，静止10 min后离心15 min分离血清，在日立7600-020生化分析仪上进行血糖和血清HCY水平检测。

1.3 血清DNA提取

用EDTA抗凝管采集空腹静脉血2 mL，进行DNA提取，用凝胶电泳进行质量检查。

1.4 多重PCR反应

PCR引物序列见表1。

1.5 多重PCR产物纯化

在20μl PCR产物中加入5 U SAP酶和2 U，Exonuclease I酶，37 ℃温浴1 h，然后75 ℃灭活15 min。

1.6 连接反应

连接引物：连接引物序列见表2。

1.7 测序

将连接产物在ABI3730XL测序仪上进行测序，将ABI3730XL测序仪上收集的原始数据用 GeneMapper 4.1（AppliedBiosystems,USA） 分析。

1.8 统计学分析

用 SPSS 17.0 统计软件进行数据处理，两组间的基因型频率和等位基因频率的比较用 χ2检验。孕妇基本资料及血清HCY 浓度采用两个独立样本的t检验, 以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 GDM组与非GDM组血糖及血清HCY水平结果

见表3。GDM组血清HCY水平明显高于非GDM组，差异有统计学意义（P=0.037）。

2.2 基因分型结果

见图1-9。rs1801394，rs1532268，rs162036各基因多态性GDM组和非GDM组比较无显著差异。

3 讨论

近年来，GDM的发生逐渐增多，关于GDM的研究亦逐渐增多，近年有学者研究发现GDM患者血清同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）水平高于正常妊娠孕妇，且妊娠期糖尿病患者A2级血清HCY水平明显高于A1级，而且，GDM患者血清高HCY者妊娠结局不良事件发生率明显高于对照组，可见，血清Hcy水平与GDM及妊娠结局密切相关。

同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）是一种含硫氨基酸，是蛋氨酸代谢过程中的重要产物，大量研究表明，GDM患者血清Hcy水平增高，是影响GDM妊娠结局的独立因素[8]。HCY代谢受几种关键酶：亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）、胱硫醚β合成酶（CBS）、蛋氨酸合成酶（MTR）及蛋氨酸合成酶还原酶（MTRR）[9]、叶酸、多种维生素共同作用。当HCY代谢依赖的酶缺陷和（或）叶酸及B族维生素缺乏时，可引起高同型半胱氨酸血症（hyperhomoeysteinemia，HHCY）。

表1 SNP位点PCR引物序列

表2 SNP位点连接引物序列

表3 两组年龄、孕周、血糖及血清HCY水平（s）

表3 两组年龄、孕周、血糖及血清HCY水平（s）

分组 n 年龄（岁） 孕周（周） 血糖（mmol/L） HCY（μmol/L）GDM组非GDM组P 值27 33-33±5 29±3 0.003 26±1 25±1 0.332 6.32±1.40 4.24±0.43 0.000 5.40±4.20 3.49±2.03 0.037

图1-3分别为rs1801394（G/G），rs1801394（G/A）,rs1801394（A/A）基因

图4-6分别为rs1532268（T/T），rs1532268（C/C），rs1532268（C/T）基因型

图7-9分别为rs162036（G/G），rs162036（A/A），rs162036（G/A）基因

近年来，影响HCY代谢的酶引起广大学者的重视。甲硫氨酸合成酶（MTR）是同型半胱氨酸代谢的关键酶，而蛋氨酸合成酶还原酶（MTRR）协同维生素B12用于维持甲硫氨酸合成酶（MTR）的还原活性。编码蛋氨酸合成酶还原酶的基因位点变异不能维持甲硫氨酸合成酶（MTR）的活性，可引起血清Hcy升高。MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）位点突变是常见的主要突变位点。近年来，关于MTRR基因多态性与胎儿先天缺陷，脑梗死，心血管疾病，儿童淋巴细胞白血病，多囊卵巢综合征，神经管畸形等疾病的相关研究较多[10-12]。而MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）位点突变与妊娠糖尿病的关系，目前国内外尚未见到报道。因此，本研究拟了解产妇HCY代谢酶相关基因MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）的多态性，探讨MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）多态性与GDM易感性的关系。本研究结果显示GDM组与非GDM组比较，GDM组血清HCY水平明显高于非GDM组（P＜0.05），但rs1801394，rs1532268，rs162036各基因多态性差异无统计学意义，可能与GDM发生的易感性无明显相关性（P＞0.05），但仍需扩大样本量进行进一步证实。