龟甲中多肽的分析方法研究

【摘 要】 本文采用液相色谱质谱联用分析龟甲活性组分中的多肽，通过MOSCOT分析检索鉴定出3个肽类化合物的氨基酸序列。

【关键词】 龟甲 多肽 分析

1仪器材料

质谱（TripleTOF 5600，AB SCIEX），离子源（NanosprayⅢ source，AB SCIEX），液相系统（nanoACQuity，Waters），BEH130 C18柱（1.7μm， 100um×100mm，安捷伦），Symmetry C18柱（5μm， 180um×20mm，安捷伦），质谱乙腈，质谱甲醇。

2液相色谱质谱联用分析活性组分中的多肽

流动相A液（水：乙腈：甲酸 = 98：2：0.1）和B液（水：乙腈：甲酸 = 2：98：0.1）。每次上样量为2.25 ?g，A液以2 μL/min的流速洗脱15 min，进行肽段吸附和除盐。接下来含5% B液的流动相以300 nl/min流速洗脱1 min，洗脱梯度：40 min内B液梯度线型从5%升至35%，5 min从35%升至80%，然后80%持续洗脱5min，最后2min恢复柱料。数据采集时，机器的参数设置如下：离子源喷雾电压2.5 kv，氮气压力为30 psi，喷雾气压15 psi，喷雾接口处温度150℃;反射扫描模式;第二个四极杆（Q2）传输窗口设置为100Da为100%;检测器的检测频率为40 GHz;离子碎裂的能量设置为35±5 eV。

3數据库检索和多肽鉴定

采用MASCOT进行分析，检索NCBI-Chelonia蛋白库，设置非特异性酶切，最低多肽长度为5个氨基酸，母离子的质量偏差设置为50 ppm，碎片离子的质量偏差设置为0.2 Da。单个多肽的置信度大于95%为可信的鉴定。

4实验结果

采用液质联用技术对龟甲活性组分中的多肽进行分析鉴定，鉴定了3个肽类化合物的氨基酸序列，分别为GGYEIGYD（437.1833m/z）、GLPGPIGPA（397.7222m/z）、GPAGPRGPAGP（466.7545m/z）。

【参考文献】

[1] 生物活性肽研究进展[J]. 刘海军，乐超银，邵伟，叶晶龙，潘虹，李金鞠.中国酿造. 2010（05）

[2] 东海海参胶原蛋白多肽的制备及清除自由基功能研究[J]. 陈卉卉，于平，励建荣. 中国食品学报. 2010（01）

[3] 黄静芳，郑秋凌，李起竖，李博.脾氨肽口服冻干粉中活性多肽的分离及鉴定[J].中南药学，2019，17（05）

作者简介：郭有爱（1964年-），女，汉族，随州，工程师，大学本科，长江职业学院。