乳腺癌中肿瘤相关巨噬细胞的浸润与eIF4E表达的关系

田世馨，尚立娜，马应全，张 城

(西北民族大学 医学院，甘肃 兰州 730030)

乳腺癌被认为是全世界女性患者的异质性癌症[1].乳腺癌依赖肿瘤微环境生长，肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞 (Tumor-associated macrophage，TAMs)是一种重要的炎症细胞，其表面标志物CD163的浸润与癌细胞的侵袭和转移相关.真核细胞翻译起始因子 4E ( eukaryotic translation initiationfactor 4E，eIF4E)是蛋白质翻译起始复合物形成的关键因子，细胞中eIF4E在正常情况下呈低表达，而在多种癌症中发生变化，包括肺癌、食管鳞状细胞癌、鼻咽癌、胃癌、子宫肌瘤、乳腺癌等.eIF4E的过度表达参与细胞生长、细胞增殖、侵袭和细胞凋亡，并且与较差的存活率相关[2].目前，eIF4E的表达和肿瘤相关巨噬细胞的浸润在乳腺癌中的关系很少报道.本研究采用免疫组化检测CD163和eIF4E在乳腺癌中的表达，分析两者在乳腺癌的表达与临床病理特征，并探讨两者在乳腺癌中的关系.

1 资料和方法

1.1 一般资料

收集甘肃省肿瘤医院病理科2016年至2018年的乳腺癌组织标本92例，经病理确诊均为乳腺浸润性导管癌.取癌旁正常乳腺组织标本74例，入组的患者均为女性，其中年龄在22～76岁.有淋巴结转移28例，无淋巴结转移64例；有神经侵犯10例，无神经侵犯82例；有脉管内癌栓13例，无脉管内癌栓79例；ki67低表达20例，ki67高表达72例.

1.2 主要试剂

eIF4E抗体(P-2)：sc-9976购自santacruz公司，按1∶100稀释，CD163为鼠抗人单克隆抗体，按1∶100稀释，快捷免疫组化试剂盒HRP(KIT-5920/5930)、PBS缓冲液、免疫组化笔、免疫组化抗原修复液、抗体稀释液均购自迈新公司.

1.3 方法

采用Maxvision法进行免疫组化染色检测eIF4E及CD163表达.所有标本均经中性甲醛固定，常规石蜡包埋，石蜡组织切片.具体操作步骤按试剂说明书进行.抗原修复采用高压锅高温修复，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封固，镜下观察.用已知的阳性片作阳性对照.

1.4 结果判定

CD163以巨噬细胞胞浆中染色呈棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色，eIF4E阳性表达定位于细胞浆，以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞.随机在高倍显微镜(×400)下取3个视野，根据显色细胞的比例计分：0分(显色癌细胞为0%)，1分(显色细胞<10%)，2分(显色细胞10%～49%)，3分(显色细胞50%～79%)，4分(显色细胞>80%).根据细胞染色强度计分：0分(癌细胞无显色)，1分(浅黄色)，2分(棕黄色)，3分(黄褐色).两种计分方法相加，所得结果为染色强度：0～1分为(-)，2～3分为弱阳(+)，4～5分为中阳(++)，6～7分为强阳(+++).

1.5 统计学处理

2 结果

2.1 CD163和eIF4E在乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中的表达情况

CD163与eIF4E在乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中表达的免疫组化结果见图1.乳腺癌组织中CD163的表达量明显高于癌旁正常乳腺组织，两组间差异具有统计学意义(P<0.001，图2A).eIF4E在乳腺癌组织中的表达高于癌旁正常乳腺组织，两组间差异具有统计学意义(P<0.001，表1).

图1 A.CD163在乳腺癌组织中高表达(×100);B.CD163在癌旁正常乳腺组织中低表达(×100);C．eIF4E在乳腺癌组织中高表达(×100);D.eIF4E在癌旁正常乳腺组织中阴性表达(×100)

注：**为P<0.001；BC为乳腺癌，paraneoplastic为癌旁乳腺组织

表1 eIF4E在乳腺癌和癌旁组织中的表达

2.2 eIF4E和CD163与TNBC临床病理特征关系

CD163的表达情况与ki67的表达高低相关(P<0.05)(表2).

表2 eIF4E和CD163表达与临床病理特征关系

2.3 乳腺癌组织中eIF4E和CD163表达的相关性

乳腺癌组织中eIF4E与CD163的表达呈正相关(r=0.273，P<0.05)，见图2B.

3 讨论

乳腺癌是来自乳腺终末导管小叶单元上皮的恶性肿瘤，是目前全世界女性最常见的恶性肿瘤之一.有研究显示，乳腺癌患者肿瘤组织中巨噬细胞约占80%，同时伴有广泛TAMs.肿瘤相关巨噬细胞与肿瘤细胞相互作用，改变细胞外基质，促进肿瘤细胞浸润转移.CD163被认为是一种高特异性的M2型肿瘤相关巨噬细胞标志物[3]，在非小细胞肺癌、卵巢癌、膀胱癌这些肿瘤中，CD163的表达越高，肿瘤的增殖和转移能力就越强.Król等[4]研究显示，犬乳腺癌组织中TAMs数量的增加与肿瘤转移能力有关.在肿瘤模型中清除TAMs可以观察到肿瘤的生长受到抑制[5].Klingen等[6]研究表明，CD163+TAMs 的存在与乳腺癌侵袭性征密切相关.本实验采用免疫组化法检测了乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中的CD163的表达.结果显示，乳腺癌组织的CD163表达高于癌旁正常乳腺组织.结合临床病理特征分析，CD163的表达与ki67的表达相关.ki67与肿瘤的发生、发展与细胞异常增殖密切相关，可有效评估肿瘤细胞增殖活性[7].而Tiainen等[8]研究发现，乳腺癌患者中M2样巨噬细胞浸润增加，高表达CD163分子，导致透明质酸的累积，促进人乳腺癌进展期间的炎症反应.由此提示，CD163阳性肿瘤相关巨噬细胞的浸润与乳腺癌的增殖、侵袭具有相关性.

在癌症背景下，翻译失调是核心，真核翻译起始因子eIF4E是翻译控制的关键，其致癌潜力严格依赖于上游MAPK相互作用激酶(Mnks)的丝氨酸209磷酸化[2].eIF4E的高表达与不良肿瘤相关并预测乳腺癌特异性存活率差[9].Norton等[10]检测eIF4E在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的表达情况，发现eIF4E在乳腺癌组织中呈高表达.而本实验应用免疫组化法检测了乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中eIF4E的表达.结果显示，乳腺癌组织中eIF4E的表达高于癌旁正常乳腺组织，表明eIF4E的表达升高引起蛋白水平升高.Graff[11]等通过分析转染后72小时收获的细胞，Western印迹评估eIF4E反义核苷酸介导培养的乳腺癌细胞中eIF4E蛋白的减少，使受eIF4E 调节的肿瘤相关蛋白表达下降，抑制肿瘤的生长等作用.有研究发现，eIF4E的高低抑制了细胞生长和迁移，增强了化学敏感性[12].我们的结果进一步发现，乳腺癌组织中eIF4E的表达与患者年龄、淋巴结转移无显著相关性.在吕红琼等[13]对75例乳腺癌和12例乳腺良性病变中eIF4E基因检测发现，eIF4E的表达与有无腋淋巴结转移、患者年龄、临床分期均无关.ShengZhou[14]等检测，原发性乳腺癌组织中eIF4E的表达与患者的年龄、淋巴结转移、TNM分期之间无显著相关性.这些研究与我们的结果相符，推测eIF4E在乳腺癌组织中与转移暂无相关关系，是一个独立的检测因子.因此eIF4E可以作为乳腺癌治疗的潜在靶点，而与乳腺癌的临床病理特征的关系还需进一步研究.

eIF4E作为真核生物蛋白质合成翻译中的关键因子，是多条信号通路中心的聚集点.它的激活，是AKT/mTOR信号通路磷酸化激活的一个关键下游事件[15]，而Jhaveri K[16]等发现，在炎性乳腺癌(IBC)患者肿瘤组织中，PI3K/mTOR通路被强烈激活，同时有强的浸润性TAMS.由此可以推测，eIF4E与肿瘤相关巨噬细胞的浸润在AKT/mTOR信号通路中起作用.我们的研究结果显示，乳腺癌组织中eIF4E和CD163的表达呈正相关，可以推测两者可能通过互相作用来促进乳腺癌的发生发展.

综上所述，本研究发现CD163与eIF4E在乳腺癌组织中表达高于癌旁组织，两者在乳腺癌组织中具有正相关性，提示CD163与eIF4E在乳腺癌的发生、发展中起重要作用，但具体机制还有待进一步发现.