儿童肺炎支原体肺炎相关实验室检测的研究进展

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(1.内蒙古科技大学包头医学院，内蒙古包头 014000；2.包头市第四医院儿科)

肺炎支原体肺炎(Mycoplasmapneumoniaepneumonia，MPP)是学龄前和学龄期儿童常见的一种肺炎，婴幼儿亦常见，占住院儿童社区获得性肺炎(Communityacquiredpneumonia，CAP)的10%～40%[1-2]，其病原体为肺炎支原体(Mycoplasmapneumonia，MP)[3]。近年来MPP的发病率呈逐渐上升趋势，不典型病例较前多见，且重症、难治病例发生率逐渐增加，早期识别重症、难治MPP，并给予恰当治疗，能够有效减轻并发症或者避免后遗症的出现。因此深入探讨早期、快速检测MP方法非常重要。本文就有关MPP检测诊断方法的研究的综述如下。

1 MP的分离培养

目前分离培养法可真实反映MP感染的存在，被认为是诊断MP感染的金标准[4]。传统的细胞培养法实验操作繁琐、耗时较长、培养检出率较低，不便于临床常规项目开展。因此，只用于科研及回顾性诊断[5]。大多数临床实验室较少尝试该法培养肺炎支原体。近年来，根据MP生长繁殖对营养物质的要求，产生了一种快速检测MP的“肺炎支原体快速液体培养基”[3]，通过在培养基上合理分配营养成分比例，并添加特殊的抑菌物质，抑制杂菌及其他微生物的生长，促进MP快速生长。MP生长过程中产生的代谢产物可以改变媒介的颜色，以此来确定有无MP生长，结果可在培养24 h后判断，具有简单、方便、快速等优势，有研究认为这种方法可以用于早期诊断儿童MP感染[6-7]。然而，由于假阳性和假阴性的结果，该方法的灵敏度和特异性有待进一步验证[3]。

2 血清学检测

目前我国临床诊断MP感染所用的主要方法仍是血清学检测，尤其是基层医院的检测，包括特异性试验和非特异性试验，前者常用的有明胶颗粒凝集试验(PA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。单次血清MP-IgM抗体持续高滴度≥1∶160可作为MP近期感染或急性感染的诊断依据；恢复期血清MP-IgM或IgG抗体滴度较急性期呈4倍或4倍以上增高或减低时，同样可确诊为MP感染[8-9]。但由于IgM抗体一般在MP感染后1周出现，3～4周达高峰，故MP-IgM须在感染1周后才能被检测到，如在MP感染早期(<1周)MP-IgM滴度很可能低或阴性。免疫缺陷患者或免疫功能发育不成熟的婴幼儿，其抗体产生能力低，可能导致假阴性的结果。双份血清MP抗体检测虽可提高阳性检出率，但无早期诊断意义，可供回顾性诊断。且由于双份血清标本采集间隔需2周，受限于家长不能很好配合恢复期血清采集，临床应用双份血清确诊MP感染仍有一定困难。冷凝集素抗体检测(CA)属于非特异性诊断，因其敏感性和特异性有限，目前已被上述抗体检测所替代。

3 分子生物学方法

聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)诊断技术可以检测出微量DNA(约1～3个支原体)。20世纪80年代开始出现用PCR技术来检测各种临床标本中的MP，具有灵敏度高、特异性强等优点[10]，且最大优势是检测时间短，不受感染时间限制。弥补了MP感染早期抗体尚未产生、MP-IgM滴度低或阴性的缺陷，且PCR检测不受患儿免疫功能发育不完善的影响，可早期诊断MP感染[11]。Blackmore TK等[12]研究在成人及儿童住院患者中比较了咽拭子标本PCR与血清学检测的敏感性和特异性。PCR的敏感性为92 %、特异性为98 %，且PCR检测到的肺炎支原体病例比血清学要多。刘春林等[13]对140例感染的标本采用PCR技术检测MP，有30例检测结果为阳性，进一步对其进行MP-IgM抗体检测后发现有21例MP-IgM抗体为阴性，由此可见，PCR检测技术具有较高的灵敏度。有研究表明，通过PCR检测发现肺泡灌洗液具有较高的准确性，且与单份血清MP抗体检测相比，其阳性反应出现的更早，在危重患儿中有较高的检出率。然而，PCR或许不能可靠地鉴别肺炎支原体感染和无症状携带者，且该技术因其价格昂贵、对实验要求高，目前仍不能完全取代血清学检测。目前实验室常用的方法有环介导的等温扩增(LAMP)技术，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术，RNA恒温扩增实时荧光检测(SAT)技术等，其中SAT技术最为敏感，能够对病原体进行准确定量。

4 血小板衍生生长因子的检测

血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor，PDGF)是一个同源或异源二聚体分子，有PDGF-AA，AB，BB，CC和DD 5种亚型。PDGF是从人的血小板中分离出来的促血管生成因子。它们是多种间质细胞如成纤维细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞等的强促有丝分裂剂、生长因子和趋化因子，并涉及胚胎发育、血管生成、创伤修复，已在临床上被广泛应用于创伤的修复治疗。人类正常肺组织的间质细胞、血管内皮、平滑肌细胞、血管周围组织及肺泡巨噬细胞有PDGF表达[14]。该因子贯穿在肺炎的损伤和修复过程中。PDGF对多种炎细胞及成纤维细胞有趋化作用，可加重炎症反应，促进细胞过度增殖及各种细胞因子和炎症介质的释放，从而促进肺纤维化的形成[14]。由于MP直接侵犯肺和支气管组织以及MP激发机体的过度炎症反应而致肺损伤，故推测MPP患者的血清PDGF表达增加。刘健等[15]动物研究发现，大鼠的肺组织经过MP反复感染后血清PDGF浓度升高较为明显，并且因此导致了肺组织纤维化，且红霉素治疗组较无红霉素治疗组PDGF-BB水平明显下降，提示肺炎支原体感染与体内PDGF水平升高存在一定的相关性。Lee HJ等[16]研究发现在MPP患者血浆PDGF-BB的表达增加，同时还发现伴特应性体质的MPP患者较无特应性体质者PDGF-BB水平更高。刘萌等[17]通过检测急性社区获得性肺炎血清PDGF浓度水平，发现血清PDGF值为6000 pg/mL时，肺炎支原体阳性检出率为93.47 %，可作为急性肺炎支原体肺炎和病毒性肺炎、细菌性肺炎鉴别诊断的基线值，结果表明PDGF可很好的区分肺炎支原体肺炎和非支原体肺炎。

5 其他相关因子检测

MPP除MP对肺组织的直接损伤外，对MPP致病起重要作用的还有免疫因素，包括固有免疫及适应性免疫的多个环节[18]。而细胞因子是免疫应答反应的重要介质，因此在感染MP后的不同时期，会出现高细胞因子血症。袁浩等[19]的研究发现，在健康儿童机体内白细胞介素-35(IL-35)表达处于正常水平，而当MP侵入患儿机体时，会引起免疫系统紊乱，出现氧化应激和炎症反应，此时IL-35出现高表达，可能通过抑制NK细胞增殖和中性粒细胞功能而抑制过强的免疫反应，保护机体免受过度免疫反应伤害。该研究显示MPP患儿血清IL-35水平与NK细胞数和中性粒细胞功能均呈负相关性。卜小芳等[20]的研究发现，支原体肺炎患儿外周血趋化因子8(CXCL8)及其mRNA表达水平增高，通过进一步观察发现，重症患儿外周血CXCL8及其mRNA进一步升高，说明其与病情的严重程度具有一定的相关性。李梅等[21]的研究中血清IL-5、IL-18和TNF-α参与了MP的发生与发展，其结果发现血清IL-5、IL-18和TNF-α在MP患儿中水平升高，且伴随着症状的加重水平上升。该结果对MPP的治疗有指导意义。上述细胞因子虽在MPP患者血清中均有高表达，但对明确MP感染的诊断缺乏特异性，可作为监控病情转归的实验室辅助诊断指标，但目前尚缺乏准确早期识别重症MPP的临界值，有待进一步深入临床研究。

6 小结

MPP的实验室检测手段对疾病的诊断有重要的意义。病原体的分离培养，血清学抗体检测和PCR技术是目前公认的实验室检测。每一种检测方法都有各自的优缺点，在MP感染的不同时期用不同的检测手段以实现优势互补，减少漏诊和误诊，提高诊断的特异度和灵敏度。近年来在寻求早期即能提示MP感染的新指标以及能早期识别重症MPP的实验室指标方面，国内外进行了一系列的研究，但均未深入探讨，仍需要进一步的深入研究。