牛无浆体和山羊无浆体双重PCR检测方法的建立

彭永帅，张利卫，王军，李月勤，王海燕

(河南牧业经济学院动物医药学院，河南 郑州 450046)

无浆体是一种专性血液寄生的可经硬蜱传播的病原体，世界范围内分布广泛[1]。我国报道的有关无浆体的病原包括牛无浆体(Anaplasmabovis)、山羊无浆体(A.capra)、绵羊无浆体(A.ovis)、嗜吞噬细胞无浆体(A.phagocytophilum)、边缘无浆体(A.marginale)、中央无浆体(A.centrale)和扁平无浆体(A.platys)共7个种。其中牛无浆体和绵羊无浆体流行最为广泛，在我国多地区的牛场和羊场均有报道，且感染率较高[1-2]。山羊无浆体是近年来新发现的一种人兽共患无浆体，最早在黑龙江省牡丹江市中心医院病人的血样品中检测到，并被正式命名[3]。后来又分别在绵羊、山羊、硬蜱和一些野生动物的样品中被检测到，可见山羊无浆体的宿主范围非常广泛[4-6]。

当前，PCR检测技术已被广泛应用于各种疾病的诊断，多重PCR方法是根据常规PCR方法衍生而来的技术，在同一个PCR反应体系中用2组或2组以上的引物同时扩增，结果发现能检测到相应的2种或2种以上的病原，比常规PCR的费用低且效率更高[7]。

本研究设计一种双重PCR方法，该方法操作简单快速且特异性和重复性良好，能够同时对牛无浆体和山羊无浆体2种病原进行快速检测，方便科研工作者和畜牧兽医相关人员对该病的诊断。

1 材料与方法

1.1 样品来源

采用2018年8月27日和9月28日采自陕西麟游羊全血DNA样品30份，-20 ℃冰箱保存备用。牛无浆体(A.bovis)、山羊无浆体(A.capra)、绵羊无浆体(A.ovis)、吕氏泰勒虫(T.luwenshuni)、牛巴贝斯虫(Babesiabovis)、尤氏泰勒虫(T.uilenbergi)、绵羊泰勒虫(T.ovis)、环形泰勒虫(T.annulata)、双芽巴贝斯虫(Babesiamotasi)和刚地弓形虫(T.gondii)阳性样品DNA由实验室保存。……