NR3C1表达与前列腺癌生化复发的相关性研究

岑昕贝 凌济忠 万跃平 万 颂 华 伟 江敏耀 习 明

1 广州市花都区花山镇卫生院外科(广州 510880) 2 南方医科大学花都区人民医院泌尿外科(广州 510800)

男性发病率最高的三种肿瘤为前列腺癌、肺癌、结直肠癌，占肿瘤总体发病率的42%，仅前列腺癌发病率占总体发病率的20%，其5年生存率占98%[1]。基于我国人口基数大，就医意识相对较差等因素，确诊为前列腺癌中晚期的患者比例高于西方国家。然而，目前前列腺癌转移和复发是其死亡的重要原因，早期诊断，及时治疗是提高前列腺癌疗效的重要措施。因此，对前列腺癌早期诊断和治疗，还有后续肿瘤进展等工作，需要临床医生和科学研究者不断去探究[2- 3]。目前对于前列腺癌的早期阶段，有着几种治疗的措施，包括根治性前列腺切除术、雄激素剥夺治疗等手段。尽管外科及放疗技术在治疗局限性前列腺癌领域快速进展，但仍有高达 40%的患者在根治术后出现生化复发。另外对于发生转移的病人，一线治疗方案目前仍然为内分泌治疗，但经过中位时间为 18～24 个月的内分泌治疗，几乎所有患者都将进展为去势抵抗性前列腺癌。表皮生长因子受体NR3C1的基因单核苷酸多态性与前列腺癌治疗的耐药性相关[4]。另有研究表明，表皮生长因子家族成员CR-1过表达会导致前列腺癌生化复发率升高[5]。Andrea等人认为NR3C1与砷诱导前列腺癌发生相关，有望作为前列腺癌的生物标志物或治疗靶点[6]。但是关于NR3C1与前列腺癌生化复发的关系尚无相关报道,本研究通过组织芯片染色和统计分析，探讨NR3C1在前列腺癌进展和预后中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

包括47例前列腺癌及28例癌旁前列腺组织，样本收集时间为2001 —2007年，组织芯片(购于西安艾丽娜生物科技有限公司(CatNo：PR807)，NR3C1抗体 (bs- 0252R，Bioss Co Ltd.，China)购于北京博奥森生物技术有限公司[7]。

1.2 方法补充Taylor 数据库的应用

1.2.1 免疫组化方法及结果判断

免疫组化操作按试剂盒要求，DAB显色,苏木素复染，按照染色阳性比例及强度，用二次记分法评判，阳性细胞数>50%为3分，26%～50%为2分，5%～25%为1分，<5%为0分。染色强度：棕褐色颗粒染色为3分，深黄色或者棕黄色为2分，淡黄色为1分，不着色为0分。两者相乘为最后结果，≥4分者为阳性(++)，0～3分为阴性(-)。用PBS代替一抗作为阴性对照。免疫组化评分分别由两位病理学家完成[8]。

1.2.2 Taylor 数据库分析

Taylor数据库[美国国立生物技术信息中心(NCBI)高通量基因数据表达平台(GEO)，档案编号[GSE21032]是一个公用的数据平台,其中mRNA表达谱芯片包含带有临床随访数据的150例原发性前列腺癌及29例非癌组织。分析NR3C1表达水平与前列腺癌临床病理特征关系。

1.2.3 统计学处理

通过SPSS 17.0软件分析数据，两独立样本t检验分析免疫组化结果，Pearson卡方检验分析免疫组化与临床病理参数的关系，Kaplan-Meier法估计生化复发生存率，Cox回归模型分析生化复发与临床病理特征的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 组织芯片免疫组化结果

前列腺癌和癌旁前列腺组织中染色强弱差异无统计学意义(2.94±1.86 vs 3.36±1.31，t=4.73,P=0.296)；NR3C1在Gleason评分高的前列腺癌组织中表达低于Gleason评分低的前列腺癌组织(2.25±2.02 vs 3.44±1.58，t=5.21，P<0.05)(见图1)。

图1 NR3C1在前列腺癌组织中表达(2×)

2.2 NR3C1与前列腺癌临床病理特征的关系

NR3C1表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系见表1，Gleason评分低的前列腺癌组织中NR3C1的表达高于Gleason评分高的前列腺癌组织(3.44±1.58 vs 2.25±2.02，t=3.25,P=0.028)，这在Taylor 数据库中也得到验证。另外，Taylor 数据库统计结果显示，NR3C1低表达与PSA复发(P=0.028)和转移(P=0.003)相关，提示NR3C1的表达与前列腺癌预后和转移存在负相关。

表1 NR3C1与前列腺癌临床病理特征的关系

2.3 NR3C1的表达与前列腺癌预后的关系

以NR3C1表达量的中位数为分割点将前列腺癌组织分为高、低组，运用 Kaplan meier 曲线分析Taylor数据库中前列腺癌患者术后生化复发时间及总体生存率与NR3C1表达量之间的关系，结果显示NR3C1低表达组患者术后生化复发生存率减少(P=0.043)(图2A)，NR3C1高表达组和低表达组在前列腺癌总体生存率上差异无统计学意义(P=0.872)(图2B)。

图2 NR3C1表达水平与前列腺癌生化复发生存率(A)及总体生存率(B)的相关性

2.4 NR3C1表达量对前列腺癌生化复发的诊断价值

通过单因素分析， NR3C1高、低表达组之间在生化复发时间上的比较差异有统计学意义(HR=0.447,95%CI0.270～0.740,P=0.002)，病理分期(HR=5.232,95%CI2.564～10.676,P<0.001)、Gleason 评分(HR=4.288,95%CI2.376～7.737，P<0.001)和是否转移(HR=21.148,95%CI10.272～43.542,P=0.012)在生化复发时间的比较差异均有统计学意义。多因素分析方面，高Gleason 评分(HR=3.173,95%CI1.225～8.218,P=0.017)和转移(HR=7.270,95%CI2.605～20.291,P<0.001)均为生化复发危险因素，见表2。

表2 Cox风险预测模型中NR3C1表达量对生化复发的诊断价值

3 讨 论

虽然亚洲地区前列腺癌发病率远低于欧洲和北美等国，但近年中国前列腺癌患者的发病率和死亡率不断上升，而且发病率上升速度更快[9]。近年来，PSA的常规临床应用已经产生了很好的效果，其对前列腺癌的早期诊断有很大帮助[10]。但是前列腺癌是一个临床异质性的癌症，存在很大的个体差异，尤其涉及到肿瘤早期诊断和后期肿瘤进展、肿瘤转移和激素抵抗性等阶段的诊断和治疗[11]。因此需要结合更多更深入的临床和基础研究、更多大样本和前瞻性的研究来探索可靠的诊疗途径。

NR3C1基因编码糖皮质激素受体，作为一种转录因子，在细胞内参与糖皮质激素应答基因的启动子特异性结合，促进糖皮质激素应答基因的转录，此外还有调节其它转录因子表达，参与细胞炎症反应、增殖和分化的功能[12]。Haitao Chen等研究发现NR3C1等基因组区域富集了PCa风险SNP块。这些结果提示，这些TFs中的信号通路可能在PCa的发病过程中发挥重要作用[13]。糖皮质激素介导的GR信号在血液恶性肿瘤以及乳腺、前列腺等实体瘤的生长过程中，分别与ER和AR相互作用，其功能作用已被广泛研究[14]。Leonardi DB等证明了GR在前列腺癌中的重要性，NR3C1与HMOX1同时高表达的患者无病生存时间比低表达患者短，而两个基因单独高表达对生化复发影响无统计学意义[15]。然而，NR3C1在前列腺癌中的作用机制和进展预后的关系如何，尚未有进一步报道。

本研究通过组织芯片免疫组化染色，检测NR3C1在Gleason评分低的前列腺癌组织中表达显著高于Gleason评分高的前列腺癌组织，初步判断NR3C1参与前列腺癌的发生发展，可能起到抑癌的作用。结合Taylor公用数据库分析，结果和我们的组织芯片结果吻合，Taylor 数据库统计结果还显示，NR3C1表达量与PSA复发和转移相关，提示NR3C1的表达与前列腺癌预后和转移存在负相关。Kaplan meier 曲线分析Taylor数据库中前列腺癌患者术后生化复发时间及总体生存率与NR3C1表达量之间的关系，结果显示NR3C1低表达组患者术后生化复发生存率减少,说明低表达组出现生化复发时间比高表达组更早。单因素分析结果显示 NR3C1高、低表达组之间在生化复发时间上的比较差异有统计学意义，病理分期、Gleason 评分和是否转移在生化复发时间的比较差异均有统计学意义。多因素分析方面，高Gleason 评分和转移均为生化复发危险因素。说明NR3C1是前列腺癌生化复发的影响因素，跟患者预后存在紧密联系。所以，NR3C1可作为评价前列腺癌预后的生物学指标。

综上所述，NR3C1作为一个抑癌基因，影响着前列腺癌的生化复发，与现有的临床指标结合能更有效预测前列腺癌的预后，这对于临床上早期诊断以及判断疾病的发展和转归等方面起着重要的作用。