冠心宁注射液安全药理学研究

程振田，袁祥萍，武文斌，李晓亮,温成泉

(1.潍坊市益都中心医院，山东 潍坊 262500；2.青岛市市立医院，山东 青岛 266011)

中药注射剂是我国独有的制剂品种，也是中医药的重大突破和中药现代化的重要内容。中药注射液质量因受药材质量、制剂工艺、成分复杂等多种因素影响导致其安全性较化药低[1]。近年来中药注射剂不良反应事件频频爆发，在社会上引起较大争议，对于中药注射液的去留问题争议颇多。2009年，我国启动了中药注射剂安全性再评价专项行动，2017年将中药注射液再评价工作列为深化药品医疗器械审评审批制度改革的重点工作之一。冠心宁注射液在临床上广泛应用，其不良反应常见胃肠道反应、发热、烦躁等，少见心慌、呼吸困难、皮肤瘙痒等[2-3]。目前国内外文献未见冠心宁注射液安全药理学相关研究报道，故本实验在药物非临床研究质量管理规范(GLP)条件下对冠心宁注射液进行了安全药理学研究，检测冠心宁注射液对血压、心电、呼吸和中枢神经系统的影响，为临床应用及不良反应检测提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及环境 KM小鼠(20±1)g，SD大鼠(220±10)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司[合格证号：SCXK(京)2016-0006]；Beagle犬(9±1)kg，购自北京日新科技有限公司[合格证号：SCXK(京)2016-0004]。

大小鼠饲养于SPF级动物房；Beagle犬饲养于普通级动物房，实验动物使用许可证号：SYXK(鲁)2018 0031。

1.1.2 药品与试剂 冠心宁注射液(石药银湖制药有限公司，批号：20160521)；戊巴比妥钠(Sigma公司，批号：18706)。

1.1.3 仪器 DSI植入式遥测系统(美国 DSI公司)；YLS-1A多功能小鼠自由活动记录仪(山东医学科学院)；JY2001型电子天平(奥豪斯仪器常州有限公司)；金属棒(直径1.4 cm，高80 cm)，自制。

1.2 方法

1.2.1 剂量设计依据 根据药物临床前研究技术指导原则确定剂量组别[4]。冠心宁注射液临床用药日最大剂量为40 mL，按照等效剂量折算系数计算小鼠等效剂量约为5.2 mL·kg-1，大鼠的等效剂量约为3.6 mL·kg-1，犬等效剂量为1 mL·kg-1。安全药理学剂量设计一般应设3个剂量组，至少包括或超过动物药效学的有效剂量。故将等效剂量设计为低剂量，低剂量的2倍和4倍作为中剂量和高剂量，则设计犬安全药理剂量为1.0、2.0、4.0 mL·kg-1，大鼠剂量为4、8、16 mL·kg-1，小鼠试验剂量为5、10、20 mL·kg-1。

1.2.2 犬安全药理遥测实验[5]取健康Beagle犬4只，雌雄各2只，将DSI(data sciences international)遥测植入子手术植入建立生理信号遥测动物模型。试验分溶媒对照组、冠心宁注射液1、2、4 mL·kg-1高中低剂量组，采用双4×4拉丁方给药，同一只犬两次给药间隔为14 d。各组犬静脉注射给予相应浓度药物溶液4 mL·kg-1，每次给药前，打开植入子采集Beagle犬稳定状态下的生理信号作为自身药前基础值，给药后连续记录12 h内生理信号。试验结束后，使用Ponemah软件对血压指标包括收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均压(MBP)，心电指标包括HR、R波幅度、ST段幅度、T波幅度、PR间期、QRS间期、QT间期进行采集。对每只动物对给药前和给药后5 min、15 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h时间点的数据进行统计分析。

1.2.2 呼吸系统影响实验 取大鼠40 只，雌雄各半，按体重均衡地分为4组，分别为溶媒对照组和冠心宁注射液4、8、16 mL·kg-13个剂量组，各组动物静脉注射给予相应的药物溶液16 mL·kg-1，溶媒对照组给予等容积的生理盐水。每只大鼠在给药前60 min放入全身体积描记箱中进行适应及呼吸频率、潮气量、每分通气量等基础数据采集。给药后将动物立即放回全身体积描计箱，并持续采集给药后至少2 h的数据。

1.2.3 小鼠协调运动和自主活动实验[6]取筛选合格雌雄小鼠各20只，按活动次数均衡地分为溶媒对照组和冠心宁注射液5、10、20 mL·kg-13个剂量组，各组动物静脉注射给予相应的药物溶液20 mL·kg-1，溶媒对照组给予等容积的生理盐水。每只小鼠给药后5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、3 h 放置于垂直竖立的光滑金属棒顶部，使小鼠头部向下，自然向下爬行，进行协调运动测试。协调运动测试后的小鼠立刻放入小鼠自由活动箱中，每箱一只，记录5 min 内小鼠自主活动次数。

1.2.4 小鼠阈下剂量戊巴比妥催眠实验[7]小鼠分组给药方法同“1.2.3”项下。每只小鼠给予相应剂量的冠心宁注射液后15 min按体重腹腔注射0.3%戊巴比妥钠溶液30 mg·kg-1。注射后立即开始观察，记录小鼠翻正反射消失时间和入睡数。如超过1 min则为发生睡眠，记录15 min内翻正反射消失超过1 min的小鼠数量。

2 结果

2.1 对Beagle犬血压、心电指标的影响 实验结果显示，与溶媒对照组比较，冠心宁注射液1、2、4 mL·kg-13个剂量组Beagle犬给药后30 min内血压和心率缓慢降低，其中30 min时减低最显著(P<0.05)，之后逐渐恢复，1 h后已无统计学差异。SBP、MBP、DBP、HR、R波幅度、ST段幅度、T波幅度、PR间期、QRS间期、QT间期等心电指标均无明显差异(P>0.05)。药后30 min Beagle犬主要检测指标见表1和表2。

表1 冠心宁注射液单次给药对Beagle犬血压的影响

表2 冠心宁注射液单次给药对Beagle犬心电的影响

2.2 对大鼠呼吸系统的影响 实验结果显示，与溶媒对照组比较，冠心宁注射液4、8、16 mL·kg-13个剂量组大鼠给药后各个时间点呼吸频率、潮气量和每分通气量无明显变化(P>0.05)。药后30 min的呼吸指标见表3。

表3 冠心宁注射液对大鼠呼吸系统的影响

2.3 对小鼠中枢神经系统的影响 实验结果显示，与溶媒对照组比较，冠心宁注射液5、10、20 mL·kg-13个剂量组小鼠给药后15、30 min自主活动次数降低(P<0.05)，其余时间无明显变化。对协调运动等级和给药后30 min睡眠率均无明显差异(P>0.05)。药后30 min小鼠自主活动次数、协调运动等级及睡眠率见表4。

表4 冠心宁注射液对小鼠中枢神经系统的影响

3 讨论

安全药理学主要研究药物在治疗剂量及以上对中枢神经系统、心血管系统和呼吸系统的影响[4]。目前一般采用DSI植入式遥测系统研究药物对血压和心电影响；用小鼠自主活动、协调运动和阈下剂量戊巴比妥钠催眠实验研究药物对中枢神经系统影响；用大鼠全身体积描记系统研究药物对呼吸系统的影响。本实验同样采取以上实验研究了冠心宁注射液对三大系统的影响，结果显示冠心宁注射液1、2、4 mL·kg-1剂量下可使Beagle犬在给药后30 min内血压和心率逐渐降低，对心电其他指标无明显影响；在4、8、16 mL·kg-1剂量下对大鼠呼吸频率、潮气量和每分通气量无明显影响；在5、10、20 mL·kg-1剂量下可使小鼠在药后15 min和30 min自主活动次数降低；而对小鼠的协调运动等级和睡眠率无明显影响。

冠心宁注射液是丹参和川芎提取物的复方制剂，具有活血化瘀、通脉养心之功效，对冠心病和心绞痛具有较好的疗效[8]。丹参具有减慢心率、增强心肌的收缩力、扩张冠脉并增加冠脉流量、降低血液黏度、抗凝血等作用[9]；而川芎的作用主要为扩张血管、增加动脉血流量、抗血小板聚集、改善微循环等作用[10]。分析冠心宁注射液的减慢心率作用主要为丹参作用所致，而降低血压作用主要为川芎扩张血管所致，以上作用皆为其药效作用，非毒性作用。而小鼠自主活动次数减少则可能为心率减慢和血压降低后导致的。