FAM20A条件性基因敲除小鼠牙龈增生的组织测量学分析

刘 静，李丽丽，刘培红，马 肃

人类基因组测序完成后，基因命名委员会将具有相似序列的基因归为一个家族(Family)，即Fam，依次编码为Fam1， 2， 3……Fam20即序列相似家族中的第20个家族，在哺乳动物体内，其成员包括Fam20A，Fam20B，Fam20C[1-2]。

临床报道，人Fam20A基因突变会导致牙龈纤维增生综合征(amelogenesis imperfecta gingival fibromatosis, AIGFS)与釉质-肾脏综合征(enamel renal syndrome，ERS)[3]。AIGFS患者通常会出现牙龈纤维性增生，釉质发育不良，牙齿萌出障碍，牙髓内钙化等病理现象[4-5]；ERS患者除表现牙龈增生和釉质发育不良外，还会出现肾钙质沉着或肾结石[6]。AIGFS和ERS患者均伴发明显的牙龈增生，其发病机制尚待研究。

本实验通过建立Fam20A条件性基因敲除小鼠动物模型，即选择性地敲除小鼠上皮内的FAM20A基因，并对其牙龈表型进行形态学测量分析，为进一步研究其机制提供组织学基础。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

ProFlex PCR仪(Life Technologies公司，美国)；OLYMPUS SZ51体视显微镜(OLYMPUS株式会社，日本)；Eppendorf单通道微量移液器1000/200/10/2(Eppendorf股份公司，德国)；LEICA Modell SM 2000R切片机(LEICA微系统股份公司，德国)；Nikon ECLIPSE 80i显微镜、Nikon NIS-Elements BR 3.0成像分析系统(Nikon株式会社，日本)；多聚甲醛(光复化工研究所，中国)；乙二胺四乙酸二钠(西陇化工股份有限公司，中国)；苏木素、伊红、琼脂糖(中杉金桥生物技术有限公司，中国)；EB 替代物(索莱宝科技有限公司，中国)；PCR-MIX 试剂盒(庄盟生物试剂有限公司，中国)。

1.2 实验动物

1.2.1 报告基因标记小鼠 Fam20Aflox/+小鼠建模于北京百奥赛图基因生物技术有限公司。

1.2.2 工具鼠 k14-Cre转基因小鼠购买于苏州南京医科大学动物模式中心。

1.2.3 条件性基因敲除小鼠的繁殖 Fam20Aflox/+小鼠和Fam20Aflox/+小鼠交配，繁殖出Fam20Aflox/flox小鼠→Fam20Aflox/flox小鼠和k14-Cre转基因小鼠交配，繁殖出k14-Cre；