利用CRISPR/Cas9 系统构建HMGA2 敲除肝癌细胞株及其功能鉴定

徐 涛顾 鹏陈傍柱叶 行梁春锦张映辉顾为望

(1.南方医科大学实验动物管理中心暨比较医学研究所,广州 510515; 2.东莞松山湖明珠实验动物科技有限公司,广东东莞 523808; 3.五邑大学生物科技与大健康学院,广东江门 529020)

高迁移率蛋白A2(high-mobility group AT-hook 2,HMGA2)属于高迁移率蛋白超家族成员,是一种非组蛋白染色质结合蛋白,主要包括三个AT-hook区以及一个酸性C 末端[1]。 AT-hook 区可以高亲和力的结合到基因组中AT 富集区域,这些区域一般都是相关基因表达调控元件,从而调控靶基因的表达。HMGA2 基因位于12 号染色体长臂,由5 个外显子构成。 HMGA2 一般在胚胎发育早期以及未分化的细胞中高表达,而在成体正常细胞或高度分化的细胞中基本不表达或表达量很低[2]。 但是,研究发现在肺癌[3]、乳腺癌[4]、胃癌[5]、结直肠癌[6]等肿瘤组织中HMGA2 的表达均显著升高,提示HMGA2可能是一个致癌基因,可以作为癌症早期诊断的潜在分子靶标[7]。 HMGA2 的异常表达通常与肿瘤发生相关,它主要影响肿瘤细胞的增殖、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、转移以及肿瘤组织内的微血管生成等过程[8-9]。

肝癌作为一种常见肿瘤,其发病率与致死率均在各种肿瘤中名列前茅,而且肝癌细胞转移性强[10]、对常规化疗药物耐受性较强[11]、预后较差等特点进一步加剧了治疗难度。 因此,筛选肝癌治疗的潜在分子靶点,对于肝癌的早期诊断、临床治疗以及预后评估具有重大意义[12]。 虽然 HMGA2 已证明在多种肿瘤中均可作为分子靶标以及预后评估的潜在分子,但HMGA2 在肝癌中的作用目前研究较少。……