维生素C对不同亚型甘氨酸受体功能的影响

徐 延，邹桂昌，左 欣，熊 伟

(中国科学技术大学 生命科学与医学部、生命科学学院，安徽 合肥 230022)

维生素C(vitamin C，VC)也称抗坏血酸，可以通过血脑屏障或细胞膜上的2型钠离子依赖性维生素C转运体(sodium-dependent vitamin C transporter-type 2，SVCT2)进入脑内及神经细胞中，并且脑中VC的浓度水平高于其它器官中VC的浓度水平[1]，这说明了VC可能对神经系统有着重要的生物学意义。如VC可以影响神经元的发育和髓磷脂的形成，另外有研究指出VC对Ⅰ型多巴胺受体、Ⅱ型多巴胺受体以及N-甲基-D天冬氨酸受体等多种膜蛋白的功能都有影响[1-3]。

神经系统中有两种重要的抑制性的神经递质，分别为甘氨酸(glycine，Gly)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)[4]。其中，Gly特异性的受体——甘氨酸受体(glycine receptor，GlyR)在中枢神经系统中分布广泛且大量存在于脊髓、脑干中。GlyR主要由两种亚基构成，分别为α和β，到目前为止发现α亚基存在多种亚型，而β亚基只有一种亚型。根据组成GlyR的α亚基的亚型不同，可以将GlyR分为4种亚型，分别为α1、α2、α3、α4亚型(GlyRα1、GlyRα2、GlyRα3、GlyRα4)[5-6]。现已发现很多物质都可以调节GlyR的功能，例如大麻素、酒精、锌离子等[7]。然而，目前尚无VC对GlyR调节作用的报道。鉴于两者在中枢神经系统中的重要性，本实验采用电生理技术，探究VC对GlyR所介导的电流的影响，以期阐明VC与GlyR之间的关系。

1 材料与方法

1.1 试剂和材料NaCl、KCl、CaCl2、Glucose、HEPES、MgCl2、Vitamin C、Glycine均购于Sigma。DMEM (Dulbecco`s Modified Eagle Media)、胎牛血清购于HyClone。胰酶购于Life Technologies。LipofectamineTM2000购于Invitrogen。玻璃电极B15024F购于武汉微探科学仪器有限公司。

1.2 溶液配制细胞外液(mmol·L-1)：140 NaCl,5 KCl,2 CaCl2,1 MgCl2,10 Glucose、10 HEPES，pH用NaOH调至7.4。电极内液(mmol·L-1)，140 CsCl,4 MgCl2,10 EGTA,10 HEPES,0.5 Na-GTP、2 Mg-ATP，pH用CsOH调至7.2。含血清细胞培养基：体积占比0.9的DMEM，体积占比0.1的纯胎牛血清，体积占比0.01的双抗(青霉素，链霉素)。

1.3 细胞培养和质粒转染实验中所用细胞为HEK-293T，细胞培养方法参照文献[8-9]和实验室以往经验，使用含血清的细胞培养基在37 ℃，5 % CO2细胞培养箱中培养。……