米诺环素对碱烧伤大鼠角膜新生血管生成的影响及其作用机制△

石琛 肖启国 王智 刘翀 张亚兰 刘明之

角膜新生血管是角膜常见的病理改变，也是常见的致盲原因，探明角膜新生血管的发生机制，寻找有效的防治药物具有重要的临床意义。米诺环素是一种半合成抗生素，除了具有广谱的抗菌作用外，还具有抗炎[1-2]、抗血管生成、抑制基质金属蛋白酶的产生和活性等[3-4]作用。本研究通过建立碱烧伤大鼠角膜新生血管模型，探讨米诺环素对碱烧伤后角膜新生血管生成的影响及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物选取6～8周龄SPF级健康SD大鼠72只(取右眼为实验眼)，体质量200～250 g(南华大学动物实验中心提供)。实验前常规裂隙灯检查，排除眼表相关疾病。

1.1.2 主要仪器与试剂裂隙灯显微镜及摄像系统[卡尔蔡司(中国)有限公司]，米诺环素盐酸盐(中国生工生物工程股份有限公司)，CD206、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单克隆抗体(武汉贝茵莱生物科技有限公司)，Trizol核酸蛋白提取试剂(上海昂博生物技术有限公司)，YBR Green PCR试剂盒[安诺伦(北京)生物科技有限公司]，逆转录试剂盒[宝日医生物技术(北京)有限公司]，二抗Max Vision TM (鼠/兔)试剂、PBS缓冲液以及各种引物(武汉华联科生物技术有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的建立及分组造模前3 d，予大鼠双眼滴妥布霉素滴眼液清洁结膜囊。从72只大鼠中随机选取24只(24眼)作为空白对照组(不做任何干预)，其余48只大鼠按照4 mL·kg-1标准给予100 g·L-1水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，并给予盐酸奥布卡因滴眼液滴眼3次，将用1 mol·L-1NaOH浸润过的实验滤纸置于大鼠右眼角膜中央40 s，之后用生理盐水冲洗结膜囊60 s，建立角膜碱烧伤模型，然后随机分为溶剂对照组和米诺环素组，每组24只(24眼)。……