治疗性单克隆抗体的药物监测：LC-MS/MS技术的应用进展

夏 颖，郭宏丽，胡雅慧，陈 峰

（南京医科大学附属儿童医院药学部药学研究中心，南京210008）

近年来，治疗性单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）在临床中应用越来越广泛，其用于多种疾病的治疗，包括各种肿瘤、免疫疾病、炎症性疾病等［1-5］。但是，mAbs的药代动力学（PK）和药效动力学（PD）过程非常复杂，具有非线性动力学特征、个体暴露差异大、以非特异性途径消除、特异性靶标介导以及药物处置个体差异大［6］。因此，需要对mAbs 进行治疗药物监测（therapeutic drug monitoring，TDM），通过测定患者体内的药物暴露、药理标志物或药效指标，实施个体化药物治疗［7-9］。

mAbs 的传统生物分析方法包括：液相放射免疫测定、固相酶联免疫吸附测定、报告基因测定、酶免疫测定、均相迁移测定等［10-11］，以酶联免疫法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）最为常用［7］，该方法简单快速、可用于高通量分析，但其存在定量范围较窄（约2个数量级）、方法开发时间长、存在交叉免疫、非特异性结合、专属性差、仅可测定抗体的游离形式等缺点，限制了其应用［12-13］。近年来，LC-MS/MS 法在大分子药物领域的应用引起了广泛的关注，与传统ELISA 相比，其定量范围更宽（3～5个数量级）、选择性高、方法开发时间短、结果更可靠［12，14］。然而，LC-MS/MS 作为小分子药物定量的“金标准”，在mAbs 的检测中存在难点，如mAbs 相对分子质量约10～15 kD，内源性干扰蛋白含量达60～80 g/L［12］，因而其样品前处理更为复杂，目前仍难以确定建立LC-MS/MS 的最佳策略。本文综述了近年来LC-MS/MS 测定mAbs 的分析方法、分析过程、常见问题及解决办法，为临床mAbs的TDM提供技术指导。

1 基于LC-MS/MS定量分析mAbs的方法分类

LC-MS/MS 定量分析mAbs 主要有两种途径：（1）“自下而上”（bottom-up approach）分析，即把mAbs 酶解成更小的肽，然后选取一个或多个特征肽进行LC-MS/MS 分析。……