PI3K/Akt通路在棕榈酸诱导的胰岛β细胞损伤中的作用

郝慧瑶，张荣金，张 芳，刘青娟，郝咏梅

(河北医科大学第二医院,河北 石家庄 050000)

2型糖尿病和肥胖目前已成为世界流行病，二者间关系密切，中国超重与肥胖人群的糖尿病患病率分别为12.8%和18.5%[1]。2型糖尿病尤其是肥胖患者在高血糖的同时，常伴有脂代谢异常，长期高血脂在糖尿病发生发展中发挥重要作用，其产生的脂毒性作用备受关注。脂毒性中，以循环血液中游离脂肪酸(Free fatty acid，FFA)的升高最为重要，FFA短期升高可以刺激胰岛β细胞大量分泌胰岛素，但长期高水平FFA则会抑制胰岛素分泌，从而导致胰岛素抵抗[2]。现已证实，胰岛β细胞上存在胰岛素信号通路，该通路障碍可使β细胞发生胰岛素抵抗，表现为β细胞分泌功能障碍[3]。本研究旨在探讨FFA在胰岛β细胞损伤中的作用及相关机制。

1 实验材料和方法

1.1材料 棕榈酸购自美国Sigma公司；鼠抗p-Akt-473单克隆抗体(SC-81433)、鼠抗Akt单克隆抗体(SC-5298)购自美国Santa Cruz公司；噻唑蓝(MTT)比色法检测试剂盒购自美国Sigma公司；胰岛素放射免疫试剂盒购自普尔伟业生物公司。小鼠胰岛β细胞瘤细胞系(βTC3细胞系) 由丹麦哥本哈根诺和诺德公司研发中心惠赠，并由本科室保存。

1.2细胞培养方法 在37 ℃含5% CO2条件下，用含10%胎牛血清、2% L-谷氨酰胺、1%青霉素/链霉素的 RPMI 1640培养基培养βTC3细胞，细胞隔天换液1次，3～4 d传代1次，每天在显微镜下观察细胞的生长状况。待细胞贴壁75%，用无血清的培养基同步24 h后用于实验。

1.3实验方法 将细胞分为空白组、棕榈酸0.2 mmol/L组、棕榈酸0.4 mmol/L组、棕榈酸0.8 mmol/L组。

1.3.1细胞增殖检测 将5×104/mL呈指数生长的βTC3细胞接种于96孔板，每孔200 μL，空白组给予正常培养，棕榈酸0.2 mmol/L组、棕榈酸0.4 mmol/L组、棕榈酸0.8 mmol/L组分别加入相应浓度棕榈酸培养。……