猪带绦虫Ts14-3-3.2重组蛋白诱导小鼠免疫应答的研究

刘美辰，欧阳任辉,2，罗 波，周必英

14-3-3蛋白是一种在真核生物中广泛存在且高度保守的蛋白质家族[1]，其蛋白二聚体可结合多种靶蛋白，通过让2个靶蛋白相互靠近而产生作用，因此很多学者将其看作一种接头蛋白或配体蛋白(adaptor proteins)[2]，从而参与了细胞信号转导、分裂增殖、衰老凋亡、酶活性的调节、细胞骨架的塑造等多种重要的生命活动[3]。

目前，很多学者以寄生虫14-3-3蛋白作为一种候选疫苗分子进行了广泛的研究[4]。课题组前期已证实猪带绦虫成虫和囊尾蚴中Ts14-3-3.2在基因[5]和蛋白(另文发表)水平上均有表达，并在成功制备了Ts14-3-3.2重组蛋白的基础上(另文发表)，本研究将该重组蛋白免疫昆明小鼠，采用间接ELISA法检测免疫小鼠血清特异性IgG及其亚类(IgG1、IgG2a)水平；通过CCK-8法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应；双抗夹心ELISA法检测免疫小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平，进一步观察其诱导小鼠产生的免疫应答水平，旨在初步探究该重组蛋白的免疫原性，为进一步用于抗囊尾蚴感染的免疫保护力研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1Ts14-3-3.2重组蛋白来源 课题组前期已通过pC2nl质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系成功制备了较高纯度的Ts14-3-3.2重组蛋白，其相对分子质量约为29 kDa，利用该重组蛋白制备的免抗Ts14-3-3.2多克隆抗体可与猪带绦虫成虫及囊尾蚴中的天然Ts14-3-3.2蛋白发生反应。

1.1.2实验动物 60只6～8周龄SPF级雌性昆明小鼠，购自重庆实岽生物技术有限公司[许可证号：SCXK(辽)2015-0001]。本实验已通过遵义医科大学动物中心审查，符合动物伦理要求。……