香菇多糖对癫痫大鼠学习记忆能力的影响及机制*

王 明 李永格

癫痫(Epilepsy，EP)是一种长期慢性发作的神经系统疾病，多发于5岁以下的幼儿，成年人发病率比较低[1]。在我国EP发病率为7‰，现有EP患者约900万，是仅次于脑血管病之外的第二大神经系统疾病[2]。EP通常采取药物治疗，虽然取得明显效果，但仍有30%～40%的EP患者不能完全治愈，甚至有10%患者发展为难治性EP[3]，给患者的身心健康带来严重危害。因此，积极开发治疗EP的新药就显得非常重要。EP发病的确切机制不清，其中脑内的炎症反应在EP的发生和发展中起重要作用[4]。因此，通过抗炎作用来治疗EP，并且减少癫痫的发作成为一种可能。香菇(Lentinus edodes)为真菌门，子菌纲，药食两用。香菇多糖(Lentinan，LNT)为香菇提取物中最重要的一种成分，具有众多药用价值，其中包括抗炎作用，但LNT是否对EP具有一定治疗作用，国内外还未见相关报道。因此，本研究通过建立EP模型大鼠，LNT干预治疗，从抗炎角度分析其可能机制，以期为临床上癫痫的治疗寻找新的药物。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物60只SD雄性大鼠购于湖北省医学实验动物中心，动物合格证号：SCXK(鄂)2018-0005，体质量200～300 g。常规饲养，所有实验大鼠均适应性喂养7 d后开始建模。

1.1.2 实验药品和试剂LNT(南京绿叶制药有限公司，国药准字H10970108)；匹鲁卡品(Sigma公司，批号：20180306)；TNF-α试剂盒、IL-1β试剂盒、IL-6试剂盒皆购自于南京建成生物工程研究所，试剂批号皆为20180924。

1.1.3 实验设备WMT-100型Morris水迷宫(四川成都仪器厂)；JC-1089A酶标仪(美国Bio-Rad)等。

1.2 方法

1.2.1 动物分组与建模60只大鼠随机分为对照组、EP模型组、LNT干预组，每组20只。对照组常规饲养，不建模；模型组建模，常规饲养；LNT干预组在建立EP模型后，采用60 mg/kg LNT灌胃，持续灌胃30 d。参考古小云等[5]建立氯化锂-匹鲁卡品EP模型。

1.2.2 Morris水迷宫检测灌胃与常规饲养30 d后，参考李永格等[6]水迷宫实验方法，检测所有大鼠的空间学习记忆能力。

1.2.3 海马组织TNF-α、IL-6和IL-1β含量测定水迷宫实验结束后，断头处死大鼠，快速在冰面上剥离海马组织，制成10%匀浆，离心取上清液，超低温冰箱保存。参照试剂盒使用说明，采用ELISA法检测海马组织中TNF-α、IL-6和IL-1β含量。

2 结果

2.1 Morris水迷宫实验结果

2.1.1 水迷宫定位航行实验结果模型组大鼠逃避潜伏期时间明显长于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；而LNT干预组大鼠逃避潜伏期时间明显短于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)，具体结果见表1、图1。

表1 各组大鼠逃避潜伏期时间 (只，

图1 Morris水迷宫轨迹图

2.1.2 水迷宫空间探索实验结果模型组大鼠平台象限路径百分比与平台象限停留时间明显短于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；而LNT干预组大鼠平台象限路径百分比与平台象限停留时间明显长于模型组(P<0.05)，差异有统计学意义见表2。

表2 各组大鼠空间探索实验结果 (例，

2.2 海马组织TNF-α、IL-6和IL-1β含量测定模型组大鼠海马组织TNF-α、IL-6和IL-1β含量明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；LNT干预组大鼠海马组织TNF-α、IL-6和IL-1β含量明显低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)见表3。

表3 各组大鼠TNF-α、IL-6和IL-1β含量 (只，

3 讨论

EP的连续发作会导致神经细胞的损伤甚至死亡，从而出现神经系统功能障碍，甚至影响学习记忆水平。Morris水迷宫实验是目前世界上评估学习和记忆功能最客观的方法，包括定位航行实验和空间探索实验。定位航行实验是通过在圆形水池中寻找固定平台的方法，寻找平台的时间即逃避潜伏期，逃避潜伏期时间越短就说明学习记忆能力越强，反之越弱。空间探索实验是将平台拆除后记录在平台象限停留的时间以及在此象限游动的距离。停留时间越长、游动距离越远说明学习记忆能力越强，反之越弱。

炎症反应是机体受到损伤后产生的一种自我保护和修复的作用。研究表面炎症反应在EP的发生过程中起重要的作用[7]，并且炎症反应与EP的发作互为因果关系，一方面炎症反应提高中枢神经元的敏感性，导致神经元过度兴奋，引起EP发作；另外EP的发作导致神经元损伤，加重神经的炎症反应，形成难治性EP的病理基础[8]。随着EP研究的深入，炎症反应中的炎症因子在EP的发作中具有重要的作用，也成为研究的主要靶点。IL-1β、IL-6、TNF-α是目前研究中最为成熟的炎症因子，蔡发良[9]和王胜军等[10]研究表明IL-1β、IL-6、TNF-α在EP的发生以及治疗中都具有重要作用。LNT为真菌香菇中的提取物，其主要成分为β-葡聚糖，临床上通常作为治疗肿瘤和调节免疫反应的生物调节剂[11]，近来研究发现LNT具有一定的抑制急慢性炎症的作用[4]，通过本实验研究发现与对照组比较，模型组大鼠海马组织TNF-α、IL-6和IL-1β含量明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，LNT干预组大鼠海马组织TNF-α、IL-6和IL-1β含量明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。说明LNT在EP大鼠体内同样具有抗炎作用。

因此，LNT具有提高EP大鼠学习记忆能力的作用，其机制可能是通过抗炎来实现的。