清热利湿方对特应性皮炎小鼠皮肤屏障蛋白表达的影响

陈梦娇,朱晓燕

(浙江中医药大学附属绍兴中医院，浙江 绍兴 312000)

特应性皮炎是临床常见的慢性复发性皮肤病，常伴发哮喘和过敏性鼻炎，临床表现为全身皮肤泛发红斑、丘疹、丘疱疹、皲裂、糜烂渗出，且瘙痒剧烈[1]。目前该病主要以抗组胺药、钙调磷酸酶抑制剂及糖皮质激素等对症治疗，但这类药物长期使用存在潜在的不良反应[2-3]。清热利湿方是绍兴中医院用于治疗特应性皮炎的常用中药方，可明显减轻患者瘙痒及皮损，改善皮肤屏障功能，但其作用机制尚不清楚。本实验通过观察特应性皮炎小鼠皮肤病理变化及皮肤组织中表皮丝聚蛋白(FLG)、兜甲蛋白(LOR)、表皮蛋白(IVL)的表达水平，探讨了清热利湿方治疗特应性皮炎的分子生物学机制，现将结果报道如下。

1 实验材料与方法

1.1实验动物 SPF级BALB/c雌性小鼠60只，6周龄，体重18～22 g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物合格证号：20130016007771，饲养于浙江中医药大学动物实验中心。置于独立通风系统单笼饲养，室温24～25 ℃，湿度40%～50%，自由饮食和饮水。所有实验步骤均经浙江中医药大学动物实验及实验动物福利委员会审核批准。

1.2主要试剂 卵清蛋白购自Sigma公司，货号：S7951/O1641；TRIzol®Reagent (Invitrigen,Cat.No.15596-018)；逆转录试剂盒：RevertAidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit(Fermentas，K1622)，Realtime-PCR 试剂盒：Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (2X)(Thermo Fisher，K0222)，FLG、LOR及IVL引物合成自Invitrigen公司。

1.3主要实验药物 清热利湿方组成：金银花12 g、白花蛇舌草12 g、土茯苓9 g、乌桕叶9 g。药物适当粉碎后，放入砂锅用3倍量水浸泡30 min，武火烧开后用文火煎煮约2 h，水量减少至约1倍药物体积为宜，然后过滤，取出药汁，再加入适量水，复煎1次，时间约30 min，合并2次滤液，静置8 h，取上清液，加热浓缩为生药量4 g/mL浓度的水煎剂待用。……