FBXW7α对结直肠癌细胞中热休克转录因子1表达和定位的影响

孙傲，焦寒，付杰军

0 引言

热休克转录因子1（heat shock transcription factor 1,HSF1）是调控热休克蛋白（heat-shock proteins,HSPs）表达的转录因子。细胞未受刺激时，HSF1以单体形式在细胞核和细胞质之间穿梭，当细胞受到刺激时，游离的HSF1以三聚体的形式磷酸化，并入核诱导靶基因的转录[1]，在热激过程中Ser326位点的HSF1磷酸化可以正向调控转录。在此期间，HSF1与错误折叠的蛋白质被蛋白酶体降解，并延迟热休克反应的衰减直到清除受损的蛋白质为止[2]。

FBXW7（F-box and WD repeat domain containing 7）是F-box家族的重要成员之一，为SCF（SKP1-Cullin1-F-box）E3泛素连接酶复合物的靶蛋白识别组分[3]。FBXW7是继K-RAS和APC之后研究发现在结直肠癌中最常见的突变基因之一[4]。研究发现结直肠癌组织中FBXW7的表达水平低于正常组织，其失活会诱导癌症的发生[5]。约7.5%的转移性结直肠腺癌患者中发现FBXW7错义突变，与结直肠癌不良预后有关[6]。FBXW7介导多种癌蛋白的降解，如NF-κB、c-Myc、Cyclin E、Notch1、c-Jun和Brg1等[7]。FBXW7位于人4号染色体长臂（4q31.3）上，分为FBXW7α、FBXW7β和FBXW7γ三个亚型，其中FBXW7α位于细胞核中，FBXW7β位于细胞质中，而FBXW7γ位于核仁中[8]。FBXW7α通过与GSK3β激活的Ser303和Ser307位点磷酸化HSF1结合，介导HSF1泛素化降解。有研究发现缺失FBXW7α导致黑色素瘤细胞核HSF1蛋白表达水平明显升高，而对细胞质HSF1表达没有影响[9]。然而，FBXW7对结直肠癌细胞胞质和胞核内的HSF1在热刺激后及未刺激状态下的表达定位的调控尚不清楚。本研究利用细胞免疫荧光法观察敲除FBXW7对温热刺激及恢复期间HSF1在胞质和胞核中的定位的影响，明确FBXW7在HSF1及激活的HSF1在胞核中的表达定位的调控作用。

1 材料与方法

1.1 细胞株及试剂

人结直肠癌细胞系HCT116、DLD1 及HCT116 WT、HCT116 FBXW7 KO、DLD1 WT及DLD1 FBXW7 KO、真核表达质粒PcDNA3-HAFBXW7α[10]均由美国哈佛医学院贝斯以色列女执事医疗中心病理系魏文毅教授馈赠。……