MTT 法和琼脂扩散法在壳聚糖创伤敷料细胞毒性试验中的应用

刁立琴，高保栓，韩婷，王亚茹

河北省药品医疗器械检验研究院 （河北石家庄 050227）

壳聚糖是一种天然的碱性多糖，具有抗菌、止血、促进伤口愈合等生物活性[1]。羧甲基壳聚糖则是一种水溶性的壳聚糖衍生物，由其冷冻干燥而成的壳聚糖创伤敷料是一种新型的创伤敷料，目前被广泛应用于外科创面的治疗中。近年来，随着对壳聚糖研究热度的增加，市场上出现了一些壳聚糖类产品，但由于产品制备方法和生产工艺的不同，导致其具备不同的特性。因此，如何对各类产品进行科学的生物学评价是目前面临的一个重要问题。

细胞毒性试验是一种体外试验，具有周期短、敏感度高、可以快速批量筛选样品的特点，常作为生物学评价的首选项目。本研究采用MTT 法和琼脂扩散法进行壳聚糖创伤敷料的体外细胞毒性试验，探讨该类产品细胞毒性试验方法的适用性，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 试验材料

试验样品为壳聚糖创伤敷料（由羧甲基壳聚糖冷冻干燥而成，来自生产企业送样）；细胞为小鼠成纤维细胞L-929（中国科学院上海生命科学院细胞资源中心）；主要试剂包括 MEM培养基（赛默飞世尔科技有限公司），胎牛血清（Biological Industries Israel Beit Haemek Ltd），DMSO（赛默飞世尔科技有限公司），异丙醇（天津市百世化工有限公司），ZDBC的聚氨酯膜（Hatano Research Institute，FDSC），高密度聚乙烯膜（Hatano Research Institute，FDSC），0.9%氯化钠注射液（石家庄四药有限公司），MTT（Sigma）。

1.2 方法

1.2.1 MTT 法

试验液的制备如下。（1）样品浸提液：根据GB/T 16886.12-2017《医疗器械生物学评价 第12部分：样品制备与参照材料 》中的要求，浸提比例选择6 cm2/ml，加入含10%胎牛血清的MEM 培养液，37 ℃浸提24 h，作为样品原液，并用空白对照液倍比稀释制备样品1/2、1/4、1/8组。……