蓬子菜总黄酮经调控TGF-β/Smad3信号通路对内皮细胞增殖、凋亡的影响研究

徐 丹，陶永梅，宋 丹，赵冰冰，王 爽，周振兴，周 悦

(黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150000)

血管内皮细胞的主要生理功能是调节血管平滑肌张力、抗炎和抗血栓形成，血管内皮细胞功能障碍是导致心血管病变的重要因素[1-2]。转化生长因子-β(TGF-β)具有多重生物学作用，可维持血管壁正常结构，可抗炎、抗癌、保护动脉等；Smad3是TGF-β/Smad3信号通路中TGF-β下游的转导因子，其表达水平较高会导致血管平滑肌细胞、内膜增生，参与动脉粥样硬化发病过程[3-4]。蓬子菜总黄酮可通过抑制炎症反应保护血管内皮细胞[5]。本实验基于TGF-β/Smad3信号通路探讨了蓬子菜总黄酮对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡的影响，旨在为其临床应用提供实验依据。

1 实验材料与方法

1.1药物及细胞 蓬子菜总黄酮，纯度为75%，由黑龙江中医药大学提供，批号：20130115。HUVECs由南京凯基生物技术有限公司提供。

1.2主要试剂及仪器 1640培养基(美国Hyclon公司)；MTT试剂(Sigma公司)；酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(卡尔文生物科技有限公司)；TGF-β1、Smad3一抗(美国R&D公司)。CO2恒温培养箱(Heal Force公司)；倒置显微镜、荧光显微镜(日本Olympus公司)。

1.3HUVECs培养及模型建立 将HUVECs放置在含10%新生牛血清的1640培养基中，在37 ℃、5% CO2培养箱中培养24 h，使用PBS洗涤2遍，加入2 mL消化液(由0.02%的EDTA以及0.25%的胰酶配置)，在37 ℃条件下消化1 min。倒置显微镜观察发现细胞收缩变圆、细胞间隙增加后，去除消化液，再次加入2 mL的培养基消化终止。观察细胞贴壁情况，配置细胞悬液，及时更换培养基，继续培养48 h。实验分为5组，对照组HUVECs正常培养；模型组及低、中、高浓度蓬子……