肿瘤标记物检测在浆膜腔积液性质鉴别中的应用

李俊虹 林 花 陈梦婷 王 勇

人体多种疾病可引起浆膜腔积液的产生和改变，鉴别积液的性质为临床的诊断、治疗和预后提供了重要依据。目前，临床对积液的良恶性鉴别的主要方法是脱落细胞查找癌细胞，这是金标准，但是浆膜腔积液的抽取因部位、数量等的局限性，不易找到癌细胞。因而，当细胞学检测的结果是阴性时不能排除恶性肿瘤的可能。研究肿瘤标志物是非常重要的课题，目前已发现多种肿瘤标记物，当机体在发生肿瘤的异常情况下，组织细胞代谢旺盛，释放大量肿瘤抗原进入胸腹腔积液，再通过主动吸收进入血液，引起恶性肿瘤患者胸腹水肿瘤标志物水平升高，其水平远远比血清高，因而体液中肿瘤标志物的检验具有更高的应用价值和意义[1～4]。

1.资料与方法

1.1 一般资料 收集2013年5月至2016年12月就诊于云南省第一人民医院门诊以及住院患者标本135例，患者签署了知情同意书，患者年龄55～80岁，男性86例，女性49例，其中胸腔积液85例，腹水50例，临床最后诊断为恶性积液的标本数80例，良性积液55例。所有标本经EDTA-K2抗凝，每份标本确保2～6ml，收到标本后立即检测，不能检测的标本放到低温冰箱中(2～4℃)保存。

1.2 研究方法

1.2.1 试剂与仪器：莱卡相差显微镜、低速台式离心机、罗氏Cobas6000免疫分析仪、免疫-雅培I2000-2、罗氏专用免疫分析试剂、免疫-雅培I2000-2专用试剂。

1.2.2 体液肿瘤标记物的检测：将收集到的良、恶性积液,按标准化操作上机检测(其中CA724、CYFRA21-1、NSE使用罗氏Cobas6000免疫分析仪检测，其余项目使用免疫-雅培I2000-2检测)，记录肿瘤标记物检测结果。判定标准：胸腹水测定数值大于正常参考范围为阳性，反之为阴性。以AFP：1.09～8.04ng/ml、CEA：0.0～5.0ng/ml、CA125：0～35U/ml、CA153：0～31.3U/ml、CA199：0～37U/ml、CA724：0.0～67U/ml、NSE：0～5.2ng/ml、CYFRA21-1：0.0～3.3ng/ml、SCC：0～1.5ng/ml为参考值，进行判定、分类和统计。

1.2.3 相差显微镜检查：标本沉淀后吸出上层液体丢弃，保留少量液体，把管底的液体轻轻混匀，制成涂片，规格约为2.5×1.0cm，待手工制片自然干燥后，固定标本，用血球瑞氏染液按染血片的方法进行染色(瑞氏染液和缓冲液1:1的比例染色)。待染色的制片自然干燥后，用莱卡相差显微镜在低倍镜下整片观察涂片，观察异常细胞的分布情况，如有核细胞是否存在结构形态的异常，重点观察形态巨大的、成团的、染色质结构疏松的、形态异常的有核细胞，用油镜辨认。

2.结果

2.1 80例恶性积液肿瘤标记物阳性率检测结果 见表1和表2。

表1 80例恶性积液检测肿瘤标记物阳性率结果

表2 恶性积液与良性积液肿瘤标志物水平比较

2.2 选取积液检测肿瘤标记物结果正常及明显增高的标本共4例，与相差显微镜下图谱及病理结果相互印证[5],见图1、图2、图3和图4。

注：标本类型：胸腔积液。体液肿瘤标记物检测结果：AFP 1.25ng/ml，CEA 2.02ng/ml,CA125 12.02U/ml，CA153 11.04u/ml，CA199 0.32U/ml,CA724 1.05U/ml,NSE 1.52ng/ml,CYFRA21-1 2.12ng/ml,SCC 0.34ng/ml，镜下可见大量中性粒细胞，此外可见破碎的细胞，病理结果未见肿瘤细胞。出院诊断：肺部感染伴胸腔积液。图1 体液肿瘤标记物正常标本的仪器及显微镜结果

注：标本类型：胸腔积液。体液肿瘤标记物检测结果：AFP 2.32ng/ml，CEA 4.32ng/ml,CA125 24.21U/ml，CA153 20.03U/ml，CA199 1.35U/ml,CA724 2.38U/ml,NSE 3.29ng/ml,CYFRA21-1 4.53ng/ml,SCC 1.02ng/ml，镜下可见组织细胞和增生、变性的间皮细胞。病理结果：未见肿瘤细胞。出院诊断：肺部感染伴胸腔积液。图2 体液肿瘤标记物正常标本显微镜结果

注：标本种类：腹水。体液肿瘤标记物检测结果：AFP 2.05ng/ml，CEA 10.32ng/ml,CA125 32.02U/ml，CA153 68.23U/ml，CA199 118.46U/ml,CA724 21.32U/ml,NSE 2.29ng/ml,CYFRA21-1 3.02ng/ml,SCC 0.35ng/ml，白细胞值较高，镜下可见较多的肿瘤细胞。病理诊断：腺癌。临床诊断：结肠癌转移。图3 体液肿瘤标记物异常标本显微镜结果

注：标本种类：胸腔积液。体液肿瘤标记物检测结果：AFP 4.02ng/ml，CEA 96.25ng/ml,CA125 456.30U/ml，CA153 79.02U/ml，CA199 119.43U/ml,CA724 2.42U/ml,NSE 1.25ng/ml,CYFRA21-1 2.02ng/ml,SCC 0.65ng/ml，显微镜下见到较多的组织细胞、间皮细胞、肿瘤细胞。病理诊断：腺癌。图4 体液肿瘤标记物异常标本显微镜结果

3.讨论

糖链抗原CA125是大分子的黏液糖蛋白，可在子宫内膜、输卵管的肿瘤中敏锐表达，其次在肺、胸及消化道等部位的肿瘤中表达[6，7]。CA125作为卵巢癌诊断和预后判断的肿瘤标志物，已广泛应用。非小细胞肺癌相关抗原(CYFRA21-1)，由细胞角蛋白-19的两个单克隆抗体组成，存在于肿瘤细胞单层和复层的上皮胞浆内[8]。CYFRA21-1增高多见于癌性胸腔积液，在腹水中增高不明显或不增高,CYFRA21-1对胸部肿瘤的诊断意义较大[9，10]。神经特异烯醇化酶(NSE)主要分布在神经和神经内分泌细胞，是烯醇化酶的r亚单位，是小细胞肺癌和神经母细胞肿瘤特异性标志物，在恶性胸腹水中具有较高的阳性率。CEA作为传统的肿瘤标志物，因为它的广谱性，在多种肿瘤的诊疗判断中仍然具有检测价值，特别是胸腹水中CEA有较高的阳性表达。本研究显示CA199在恶性胸腹水中阳性率为52.5%。在其他恶性肿瘤中也有一定的阳性率，如乳腺癌、卵巢癌、肺癌等。某些消化道炎症CA199也有不同程度的升高。糖链抗原CA724在疾病分期和判断胃肠道癌症、卵巢癌患者时可以作为良好的指标。CA153是乳腺癌最重要的特异性标志物，CA153动态测定有助于乳腺癌治疗后复发的早期发现。AFP可早于影像学 6～12月出现异常。病毒性肝炎、肝硬化绝大部分AFP<400ng/ml。本研究的数据显示恶性积液的肿瘤标记物水平结果明显增高，因此，恶性积液的肿瘤标记物检测有很好的应用价值和意义。下一步的研究应该对良恶性肿瘤患者的胸腹水和血清肿瘤标记物同时筛查，结合体腔液细胞学强荧光参数检测、病理细胞学检测，参考生化指标(如PH、LDH、ADA等)进行分析，快速、准确地为临床鉴别诊断提供依据[11]，必要时选择生物芯片、基因检测等方法辅助诊断。