红曲霉繁殖相关wetM基因的克隆与生物信息学分析

王炫栋， 杨孙玉悦， 胡凌鸣， 何智鹏， 丁允章， 蒋冬花

(浙江师范大学 化学与生命科学学院，浙江 金华 321004)

红曲霉(Monascusspp.)是我国历史悠久的真菌资源，在许多方面都有非常广泛的应用[1-2]。探究红曲霉的繁殖机制能够更好地调控红曲霉的生长发育。红曲霉繁殖过程中的子囊孢子和分生孢子在工业、食品业和基础研究中都有重要意义[3]。在工业上调控孢子产生数量可降低生产成本，控制污染。在食品业中，孢子的数量与次级代谢产物[4-5]的产量息息相关。在医学上，孢子是致病真菌散播的主要方式。因此，利用生物信息学探明红曲霉繁殖机制中相关基因的功能在各个方面都具有重要意义。在模式丝状真菌构巢曲霉(Aspergillusnidulans)中已经探明与繁殖相关的基因有brlA、wetA、abaA等，其相对应的转录调控蛋白家族也已有较多的研究[6-9]。但红曲霉中的繁殖调控路线和众多基因还不明确。本研究在红曲霉中发现了与构巢曲霉孢子发育相关的wetA(wet-white “湿-白样”)有较高同源性的基因，推测这个基因可能与红曲霉繁殖相关，命名为wetM(wet-white Monascus)基因。从红曲霉中首次克隆出wetM基因，并对此基因进行测序、基因调控转录蛋白生物信息学分析和结构功能的预测。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 从红曲米中筛选纯化保藏的紫色红曲霉(Monascuspurpureus)Mp-21菌株。

1.1.2 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基[10]。

1.2 方法

1.2.1 紫色红曲霉菌株Mp-21活化 将保藏管Mp-21菌株的适量菌丝接种至PDA平板，30 ℃恒温培养7 d后,将菌落中的新生菌丝接种至新的培养基中，同样条件下继续培养，重复3次[11]。……