褪黑素通过PPARγ-LXRα调控THP-1巨噬细胞ABCA1表达

王 雨 陈连凤 王 伟 宋 玮 严晓伟

褪黑素(melatonin)是脊椎动物的松果体合成的一种吲哚类激素，对机体胆固醇代谢具有调节作用[1]。胆固醇外流是将细胞内游离胆固醇(free cholesterol,FC)等转运到胞外HDL颗粒的过程，是胆固醇逆转运的第一步，也是机体调控动脉粥样硬化(atherosclerosis)发生、发展的关键步骤[2]。其中，三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)在此过程中起重要作用[3]。研究发现，褪黑素缺乏可导致大鼠巨噬细胞ABCA1介导的胆固醇外流功能降低，并导致ABCA1受体表达下降，但机制尚不明确[4]。笔者通过THP-1来源巨噬细胞体外培养，并用褪黑素溶液及相应受体拮抗剂干预巨噬细胞，探讨褪黑素调控巨噬细胞ABCA1表达的作用机制。

材料与方法

1.主要试剂:褪黑素干粉购自美国Sigma 公司。THP-1细胞购自北京中国医学科学院基础医学研究所细胞中心。RPMI-1640培养基购自英国Gibco-BRL公司。胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、牛血清白蛋白(bovineserum albumin，BSA)购自美国Hyclone公司。佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA)购自美国Sigma 公司。Trizol、总RNA 抽提试剂盒、cDNA合成试剂盒购自大连宝生物有限公司。ABCA1、LXRα和GAPDH引物购自上海生工生物工程股份有限公司。全蛋白提取试剂盒购自北京普利莱生物技术公司。兔抗人ABCA1 多克隆抗体、兔抗人LXRα多克隆抗体、兔抗人GAPDH 多克隆抗体购自英国Abcam公司。HRP 标记山羊抗兔IgG二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司。PPARγ抑制剂GW9662、非选择性MT1/MT2受体拮抗剂Luzindole、选择性MT2受体拮抗剂K185购自美国Sigma公司。LXRα抑制剂GSK2033购自美国Glaxo Smith Kline公司。

2.THP-1细胞的培养和巨噬细胞的分化：THP-1细胞在RPMI-1640培养基和10%胎牛血清中培养，37℃、5%CO2-95%空气的恒温培养箱中。……