微生物磷脂酶D的克隆表达研究进展

董自星，杨爽爽，唐存多，姚伦广，阚云超

（1.南阳师范学院昆虫生物反应器河南省工程实验室和河南省南水北调中线水源区生态安全重点实验室, 河南南阳 473061；2.南阳师范学院体育学院, 河南南阳473061）

磷脂酶是指催化磷脂的各种水解反应的一类酶。根据水解磷脂位置的不同，可以将磷脂酶分为五类：磷脂酶A1、A2、B、C和D。其中，磷脂酶D（Phospholipase D，简称PLD，EC 3.1.4.4）是作用于磷脂分子中磷酸与有机碱间磷酰氧键（P-O）的一类酶[1]。作为磷酸二酯酶超家族的一员，PLD是催化磷脂水解第一步反应的关键酶之一，参与细胞脂质代谢、信号转导及生物膜形成等[2]。此外，它还可以催化各种羟基化合物与磷脂碱基结合形成新的磷脂，这一重要的特性称为磷脂酶D的碱基交换反应（Base exchange reaction），也称为转磷脂反应（Transphosphatidylation）[3]。利用PLD的这一重要特性可以合成稀有磷脂（如磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油以及新型甘油醚磷脂等）[4−6]、新型药物释放系统[7]等。因此，PLD被广泛应用于细胞生物学、食品和医药等领域。

磷脂酶D广泛分布于病毒、动物、植物和微生物中[3]。由于具有较好的转磷脂活性、较广泛的底物特异性和较强的底物耐受性，微生物来源的磷脂酶D在工业生产中的应用较为广泛。自20世纪70年代以来，已报道的PLD主要来源于革兰氏阳性菌，包括链霉菌属（Streptomyces）[8−10]、轮枝链霉菌属（Streptoverticillium）[11]、马杜拉放线菌属（Actinomadura）[12]、芽胞杆菌属（Bacillus）[13]、棒状杆菌属（Corynebacterium）[14]和 热 密 卷 菌 属（Thermocrispum）[15]等。其中，链霉菌来源的PLD是目前报道最多的，且它们具有较好的水解和转磷脂活性[1]。一些……