铁酸锌磁性纳米颗粒诱导活性氧及促死亡自噬杀伤肾癌细胞的实验研究

杨荷宇，张 力,3,4，闻慧琴，温诚浩，王 辉，梁朝朝,3

肾细胞癌是源自肾实质泌尿小管上皮系统的恶性肿瘤。据统计，2020年美国预计新发肾癌病例数73 750例，预计死亡病例数14 830例。早期肾癌患者可行手术治疗，而部分患者在初次就诊时已发生远处转移，并且转移性肾癌患者对化疗或免疫治疗不敏感。因此，对早期肾癌进行灵敏特异的诊断以及摆脱转移性肾癌的治疗困境，具有重要的临床意义。

纳米材料是指至少在三维空间中的一维处于纳米尺度(1～100 nm)范畴内的材料，其中，铁酸锌纳米颗粒(zinc ferrite nanoparticles, ZF NPs)因其优良的特性而备受关注。较于传统MRI造影剂，ZF NPs不仅能更加清晰地显示狭窄的血管，还在抗肿瘤等方面具有广阔的应用前景。在肾癌诊断中，MRI可区分良性实体肿块与肾细胞癌亚型，明确肿瘤的组织学分级，并可避免不必要的手术。该文主要研究ZF NPs的抗肿瘤效应，并进一步探讨活性氧(reactive oxygen species，ROS)及自噬在ZF NPs杀伤肾透明细胞癌Caki-1中的关联与调控机制，旨在为临床诊疗肾癌提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

六水合三氯化铁(FeCl·6HO)(美国Sigma Aldrich公司)；氯化锌(ZnCl)、聚乙二醇、氨水(北京国药集团)；MTT、二甲基亚砜及海藻糖(德国Bio Froxx公司)；ROS检测试剂盒(上海碧云天生物技术研究所)；抗LC3B抗体(美国Proteintech公司)；渥曼青霉素(美国MCE公司)；荧光显微镜(日本Olympus公司)；流式细胞仪(美国Beckman公司)。

1.2 材料合成

称取1.514 g的FeCl·6HO与0.382 g的ZnCl溶于25 ml去离子水中，磁子搅拌至溶液澄清，加入5 g聚乙二醇，继续搅拌形成溶液A。配置0.7%的氨水溶液，在磁子搅拌下，迅速向溶液A中加入25 ml的氨水溶液，混合溶液在超声破碎机下超声30 min后，100 ℃下加热30 min。……