hUC-MSCs对缺氧缺血脑损伤新生大鼠脑组织的保护作用研究

陈茂琼，向 敏，宋海良，王 岚，匡梦岚，张丽娟，熊 英，何志旭，许键炜，高 鸿，秦 臻

围生期多种因素引起的缺氧、脑血流减少而致的新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)是新生儿死亡和婴儿神经系统功能障碍的主要原因，研究表明，HIE通过氧化应激、炎症、凋亡和兴奋性毒性导致延迟的细胞死亡。目前，亚低温等常规治疗对于缺氧缺血性脑病有一定的疗效，但无法逆转神经细胞损伤。近年来，对间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cell，MSCs)，特别是来源更加原始，分化能力更强的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUC-MSCs)研究的深入，为HIE的治疗带来了新的希望。研究显示，MSCs因其具有自我更新和多项分化潜能以及分泌、旁分泌等能力，同时还参与信号通路的调节，对受损组织发挥保护作用。该实验旨在通过移植hUC-MSCs治疗缺血缺氧诱导的新生大鼠HIE，并探讨hUC-MSCs对神经细胞的保护作用及机制。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

新生7日龄健康SD大鼠18只，雌雄不限，体质量(15±2)g[贵州医科大学实验动物中心，动物合格号SYXK(黔)2018-0001]；新生儿脐带(贵州医科大学附属医院产科)。相差显微镜(德国Leica公司)；CO培养箱(美国Thermo Forma公司)；台式高速冷冻离心机(Allegra 64R，美国贝克曼库尔特公司)；CM1950型冰冻切片机(德国徕卡公司)；超净工作台(苏州苏净集团)；U-LH100L-3活细胞工作站(日本OLYMPUS公司)。L-DMEM培养基、10%FBS及0.25%胰酶 (美国Hyclone公司)； 2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色液(北京索莱宝科技有限公司)；TRIzol、转染试剂(美国Ambion公司)；Q-PCR引物(生工生物工程上海股份有限公司合成)。

1.2 方法

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hUC

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MSCs的分离、培养及鉴定 采集新生儿长脐带约10 cm(产妇年龄在20～35岁之间，身体健康，无各种急、慢性疾病。……