血管紧张素Ⅱ 2型受体基因敲除小鼠的构建、繁育和基因型鉴定

蒋 吉，胡姗姗，魏 伟

Agtr2作为G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptors, GPCRs)，一般在胚胎时期表达较多，出生后表达水平大幅降低，但在病理状态，如炎症、损伤等情况下，其表达水平较正常生理状态显著增高。有文献报道，直接激动Agtr2导致了血管内皮的舒张，抑制炎症反应以及促进神经元的修复再生。课题组既往研究显示，Agtr2在佐剂性关节炎(adjuvant induces arthritis，AIA)大鼠滑膜组织中的表达升高可在氯沙坦治疗后进一步上调，且上调水平与炎症指数的减轻呈正相关，提示Agtr2可能具有缓解类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)炎症免疫反应的作用。在此基础上，该研究构建了Agtr2基因工程小鼠，并对Agtr2小鼠进行扩繁、基因型鉴定和蛋白检测，将为进一步研究Agtr2在疾病发病机制中的作用以及作为药物的作用靶点提供重要实验基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物

55只7周龄C57BL/6J鼠，30只雄鼠、25只雌鼠，体质量为(20±2) g，购自江苏集萃药康生物科技有限公司，生产许可证号：SCXK (苏) 2015-0001。所有实验均经安徽医科大学临床药理研究所动物实验伦理委员会批准，并于SPF级实验室饲养繁育小鼠。

1.2 主要试剂

核酸染料购自北京康润生物科技有限公司；琼脂糖凝胶购自法国Biowest公司；Genotyping Mix购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司；Proteinase K购自美国Sigma Aldrich公司；异丙醇购自国药集团化学试剂有限公司；RIPA蛋白裂解液、苯甲基磺酰氯、5×电泳加样缓冲液购自江苏碧云天生物技术公司；抗GAHDH抗体购自美国Affinity Biosciences公司；抗Agtr2抗体购自英国Abcam公司；辣根酶标记的山羊抗兔IgG购自北京中杉金桥生物公司；ECL化学发光试剂盒购自上海天能科技有限公司。……