WZB117下调YAP影响胃癌细胞干性和糖酵解的机制

张晨嵩，潘成武，王庆康，李 靖，汪 虎，马家驰

胃癌是全世界第四大最常见的癌症，是每年死亡人数第二多的癌症。Hippo途径在组织稳态和早期胚胎细胞规格方面起着至关重要的作用，与细胞能量代谢密切相关。Yes相关蛋白(Yes-associated protein，YAP)是该途径的核心组成部分。抑制YAP的表达可抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和转移。WZB117[2-氟-6-(间羟基苯甲酰氧基)苯基-羟基-羟基苯甲酸酯]是一种合成的小分子糖酵解抑制剂，可通过限制糖酵解来抑制小鼠体内的肿瘤增长。WZB117可以下调GLUT1蛋白、细胞内三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)和糖酵解酶的水平，并上调AMP依赖的蛋白激酶[Adenosine 5′-monophosphate (AMP)-activated protein kinase，AMPK]的磷酸化，导致癌细胞的细胞周期停滞、衰老和凋亡。该研究探讨WZB117通过下调YAP的表达进而影响病人来源的胃癌细胞能量代谢的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

新鲜的胃癌组织用PBS洗涤以除去血液后，将组织切成1～3 mm大小的碎片，漂浮在含15%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的杜氏磷酸缓冲盐溶液改良的Eagle培养基中。将胃癌组织碎片在37 ℃、5% CO的潮湿空气中培养。当细胞汇合至约80%，用胰蛋白酶消化，然后以1 ∶3的分离比重新铺入较大的培养瓶中。第4代的胃癌细胞用于后续实验。临床样品的使用经医院伦理委员会批准，并获得患者的书面知情同意。

1.2 细胞分组及培养

将胃癌细胞接种植至6孔板中，在37 ℃、5%CO培养箱中培养，观察细胞在培养24、48 h的生长情况并计数。将胃癌细胞随机分为3组：正常组、低糖对照组和WZB117处理组。正常组细胞培养于DMEM高糖(4.5 g/L)中，添加含100 ml/L胎牛血清、100 IU/ml青霉素、100 μg/ml链霉素的完全培养基；……