高盐环境对大鼠冠状动脉平滑肌钙库操纵的钙内流及其介导的收缩功能的影响

何 可，肖 慧，卢昊阳，代曼玉，沈 兵，赵 韧

膳食钠摄入量增高，冠状动脉痉挛和缺血性心脏病的风险增加，这与冠脉血管反应性的变化有关。研究证实，高盐饮食使血管床对激动剂的反应性增强。盐敏感性高血压会引起细胞外液中的钠水潴留，神经体液因素通过冠脉内受体机制影响血管张力。有研究发现血栓素及内皮素受体下游IP受体-SOCE途经关键性调节了小动脉血管张力。钙库操纵的钙内流(store-operated Caentry，SOCE)保持内质网Ca的稳态，是维持血管平滑肌(vascular smooth muscle cells，VSMCs)收缩功能的重要环节。虽然高盐饮食可能导致血管反应性及细胞外Na浓度的暂时性增加，但其是否改变SOCE介导的冠脉收缩及其Ca内流机制尚不清楚。该研究旨在讨论细胞外高盐环境对冠状动脉收缩功能的影响，为高血压相关缺血性心脏病临床治疗提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 材料

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动物 本研究中所用大鼠均严格遵守《中华人民共和国实验动物管理条例》，并已得到安徽医科大学动物伦理委员会的允许。实验用动物为体质量300 g左右清洁级雄性SD大鼠。所有实验大鼠均于25℃左右通风环境下自由活动、饮食。

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试剂与仪器 Orai1、ET抗体购自美国Affinity Biosciences公司；STIM1抗体购自美国GeneTex公司；U46619购自美国Sigma公司；ET-1购自美国MedChemExpress公司； Pluronic F-127购自美国Invitrogen公司；微血管张力检测仪(DMT620M)购自丹麦 Danish Myo Technology A/S 公司；体式辅助显微镜购自日本奥林巴斯株式会社；荧光显微镜(Nikon T200)购自日本尼康公司。Krebs液(mmol/L) NaCl 118、KCl 4.7、CaCl2.5、KHPO1.2、MgSO·7HO 1.2、NaHCO25.2、CHO11.1；高钾溶液(mmol/L) NaCl 58、KCL 60、CaCl2.5、KHPO1.2、MgSO·7HO 1.2、NaHCO25.2、CHO11.1；1 mol/L NaCl溶液。

1.2 方法

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冠状动脉环的制备 大鼠用CO窒息处死后，手术剪打开胸腔，取出心脏后置于灭菌 PBS 液中轻轻挤压排出血液，在显微镜下仔细剥出冠状动脉，分离周围肌肉组织，注意不要钳夹及牵拉血管。……